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青島捷世康生物科技有限公司
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逆轉錄酶活性PERT熒光定量PCR 檢測試劑盒產品說明書

時間:2022/10/20閱讀:1322
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主要用途

 

逆轉錄酶(reverse transcriptase)活性PERT熒光(SYBR GREEN)定量PCR檢測試劑是一種旨在運用SYBR綠色熒光染料作為標記信號,結合產物增強型逆轉錄酶PERTPCR擴增既方便、快速,又實時檢測和定量分析擴增產物,即逆轉錄酶酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應用于臨床病毒感染、生物制品,例如疫苗等病毒污染的監測。產品即到即用,性能穩定,無核酶污染,操作便捷,敏感高效,定量準確,重復性強。

保存方式

 

保存在-20冰箱里,避免反復凍融;染色液(Reagent F)避免光照,有效保證6

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器

4℃微型臺式離心機:用于樣品操作

PCR管:用于樣品擴增操作的容器

熒光定量PCR儀:用于熒光定量PCR反應

 

實驗提示

 

一、 標準樣品制備

 

1. 準備好7個無菌的1.5毫升離心管,標記為17號管

2. 按下表分別加入18微升稀釋液(Reagent I27

3. 移取5微升標準液(Reagent H1號管

4. 小心移取2微升1號管的標準液(Reagent H2號管,混勻

5. 小心移取2微升2號管稀釋的標準液(Reagent H3號管,混勻

6. 小心移取2微升3號管稀釋的標準液(Reagent H4號管,混勻

7. 以此類推

8. 17號管放進冰槽里備用;標準管濃度見下表

管號

稀釋液(Reagent I

標準液(Reagent H

標準AMV轉錄酶活性

1

——

5微升

103單位/微升

2

18微升

2微升1號管

104單位/微升

3

18微升

2微升2號管

105單位/微升

4

18微升

2微升3號管

106單位/微升

5

18微升

2微升4號管

107單位/微升

6

18微升

2微升5號管

108單位/微升

7

18微升

空白對照

空對照

一、 定量檢測

 

1. 移取2微升引導液(Reagent A0.5毫升PCR

2. 加入2微升底物液(Reagent B

3. 加入6微升補充液(Reagent C

4. 放進4微型臺式離心機瞬時離心5

5. 70溫度下孵育3分鐘

6. 冰上預冷

7. 加入13微升轉錄液(Reagent D

8. 加入2微升上述制備的標準液(Reagent H待測樣品(注意:選擇4個標準品+空對照)

9. 總量25微升

10. 放進4℃微型臺式離心機瞬時離心5

11. 42溫度下孵育30分鐘

12. 95溫度下孵育5分鐘

13. 置于冰槽里備用

14. 移取15微升反應液(Reagent E0.5毫升PCR

15. 加入2微升上述冰槽里備用的轉錄產物

16. 加入2.5微升染色液(Reagent F

17. 加入5.5微升補充液(Reagent D到總量25微升

18. 使用1000微升槍頭加入1封隔液(Reagent G(注意:參見注意事項10

19. 即刻放進熒光定量PCR

20. 熒光定量PCR反應程序為(選擇FAM染料)

注意事項

 

1. 本產品為20PCR反應

2. 本產品檢測敏感度達10-8單位/微升

3. 操作時,須戴手套

4. 本產品適合各種熒光定量PCR

5. 建議整個操作在4℃下進行

6. 必須使用帶濾芯的槍頭

7. 所有器皿、離心管、液體等無RNA酶污染

8. 使用時,避免污染母液

9. 用戶根據實際情況,選擇45管標準區間范圍

10. 根據用戶PCR儀的性能,決定是否加入封隔液(Reagent G

11. 配制完成后,即刻進行擴增反應,以確保反應物的活性

12. 試劑避免反復凍融

13. PCR擴增反應的最初3個循環為定量基線;315個循環的熒光信號的10倍值為熒光閾值;熒光信號達到閾值所需的循環數為Ct;建議使用Log ΔRn相對定量參數(參考圖像如下)

1. 通常103104皮單位(pU)逆轉錄酶等于110個病毒粒子(virion

2. 通常103皮單位(pU)逆轉錄酶等于7080逆轉錄酶分子

3. 本公司提供系列逆轉錄酶活性檢測試劑產品


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