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青島捷世康生物科技有限公司
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鈣鹽染色液(Von Kossa 銀法)說明書

時間:2022/7/15閱讀:1470
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產品簡介:

鈣在人體內大量存在,構成骨骼作為支持人體的支架,在分泌、運送、肌肉收縮、神經 傳導等也起重要作用,鈣在機體內以兩種形式存在,一種是離子鈣,存在血液循環內,即所謂血鈣;另一種是結合鈣,和蛋白、碳酸或磷酸結合而沉著在組織內,除骨骼和牙齒外正常時鈣滲透在所有組織和細胞中,一般不以固體狀態出現在組織內,但在某些情況下鈣析出成固體并沉著于組織內,則為病理性鈣鹽沉著,沉著的鈣鹽主要是磷酸鈣,其次為碳酸鈣。鈣鹽通常是單折射的,但草酸鈣是雙折射的,當使用 HE 染色時鈣一般呈紫藍色,許多染料可以于鈣形成螯合物,包括茜素紅 S、紅紫素、核固紅等,茜素紅 S 屬一種蒽醌類衍生物,是茜素磺酸鈉鹽,它能與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物。

鈣鹽染色常用方法有硝酸銀法和茜素紅 S 法,鈣鹽染色液(Von Kossa 銀法)又稱馮庫薩染色液,屬金屬置換法,其原理在于 Von Kossa 銀溶液作用于含有不溶性鈣鹽的切片時, 鈣被銀置換,銀鹽在光的作用下被還原為黑色金屬銀,適用于大量樣本的鈣鹽組織染色。該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

1、10%中性福爾馬林固定液

2、系列乙醇

3、蒸餾水

 

操作步驟(僅供參考):

一、常規染色

1、組織固定于 10%中性福爾馬林固定液,常規脫水包埋。

2、切片厚度 3~5um,常規二甲苯或脫蠟透明液脫蠟至水,蒸餾水洗。

3、切片入 Von Kossa 銀溶液,強光照射 15~60min(見注意事項 2),蒸餾水洗 1min。

  4、入海波溶液處理 2min,HE 染色液或 Van Gieson 復染細胞核 1min。

5、常規脫水,二甲苯或脫蠟透明液透明,中性樹膠封固。


二、不溶性鈣染色

1、組織固定于 10%中性福爾馬林固定液,常規脫水,注意在 95%乙醇中脫水應充分。

2、塑料包埋,室溫過夜,37℃烤箱中聚合 2~4 天,-20℃冰箱冷卻 15~20min。

3、切片厚度 3~5μm,未脫鈣骨切片脫塑至水,蒸餾水洗。

4、切片入 Von Kossa 銀溶液,強光照射 10~60min(見注意事項 2),蒸餾水洗。

5、入海波溶液處理 2min,HE 染色液、中性紅或 Van Gieson 復染細胞核 1min。

6、常規脫水,二甲苯或脫蠟透明液透明,中性樹膠封固。

 

染色結果:

    

鈣鹽

黑褐色至深黑色

細胞核

根據復染液不同而不同

陰性對照:如有必要,可做陰性對照。取另外一張連續切片脫蠟(脫塑)至水,置于Von Kossa對照液處理10~20min,蒸餾水沖洗,與試驗片一同入Von Kossa 銀溶液,余下步驟同上,結果為陰性。 

 

注意事項:

1、鈣鹽組織固定以中性福爾馬林為佳,不宜采用Bouin 液等酸性固定液和甲醛鈣固定液;如用常規的10%福爾馬林固定,固定4~6h 后即可進行脫水包埋,以防止固定液酸化導致鈣鹽溶解。

2、作用時間取決于陽光照射時光的強度和時間;如暴露于強光下 15min 已經足夠;如暴露于紫外燈下10min 即可;如暴露于一般光線下,宜適當延長曝光時間。

3、如果鈣鹽染色過深,可用蒸餾水適當稀釋 Von Kossa 銀溶液或減少光照時間或光照強度;如果鈣鹽染色較淺,應增加 Von Kossa 銀溶液用量并增加光照時間和光照強度。

4、該染色法可以區分尿酸鹽和鈣鹽,其原理在于鈣鹽不溶解于碳酸溶液,尿酸鹽易溶解于酸鋰溶液,切片經鋰處理后入VonKossa 銀溶液并置于強光下尿酸鹽呈陰性反應。

 

有效期:12個月有效;4℃運輸,4℃保存。 

 




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