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青島捷世康生物科技有限公司
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超氧化物歧化酶( SOD)試劑盒說明書(NBT法)

時間:2022/5/13閱讀:2517
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分光光度法 50 /48 

正式測定前務必取 2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子

發生岐化作用,生成 H2O2  O2SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成

酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

測定原理:

通過氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-.)O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲

臜,后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,

說明 SOD 活性愈低,反之活性越高。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制:

提取液:液體 60mL×1 瓶,4保存;

試劑一:液體 15mL×1 瓶,4保存;

試劑二:液體 350μL×1 支,4保存;

試劑三:液體 10mL×1 瓶,4保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4保存。

粗酶液提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量

104 個):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 

取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超  3s,間隔 10s,重復 30  );

8000g 4離心 10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟

1 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 560nm,蒸餾水調零。

2 將試劑二用蒸餾水稀釋兩倍,用多少配多少。(試劑二和蒸餾水 11 稀釋)

3 將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解(溶解后一周內用完),再用蒸餾水稀釋 4 倍,用多少

配多少(試劑四和蒸餾水 13 稀釋)。

4 測定前將試劑一、三和四在 37(哺乳動物)或 25(其他物種)水浴 5min 以上。

5 樣本測定(在 EP管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μL 測定管 對照管

試劑一 240 240

試劑二 6 6

樣本 90

蒸餾水 90

試劑三 180 180

試劑四 510 510


充分混勻,室溫靜置 30min 后,加入 1mL 玻璃比色皿,560nm 處測定各管吸光值 A

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL

蒸餾水)。

4SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

對照管的范圍是 0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長

 40min。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中

乘以相應稀釋倍數。


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