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青島捷世康生物科技有限公司
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組織活性氧(ROS)檢測試劑盒

時間:2020/9/7閱讀:2211
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   活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。
   組織活性氧檢測試劑盒是一種利用新型熒光探針O13進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的O13 ROS探針為紅色熒光的活性氧探針,具有510/610nm的大激發/發射波長。

使用方法:

使用注意事項:
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。
● O13染色液為DMSO溶液,冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解,吸頭也需要放在培養箱預熱,否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
● 使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。
● 選做,陽性對照誘導劑可以按照1:1000的比例使用。例如標記好探針的細胞共1毫升,可以加入1μl的陽性對照誘導劑刺激。通常刺激后20-30分鐘內可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細胞,活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內觀察不到活性氧的升高,可以適當提高活性氧陽性對照誘導劑的濃度。如果活性氧升高得過快,可以適當降低活性氧陽性對照誘導劑的濃度。
樣本處理:
1.剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。
2.準確稱取50mg組織,加入1ml勻漿緩沖液A,用玻璃勻漿器充分勻漿。
3.在1000g,4℃離心10分鐘,棄沉淀,取上清。
樣本檢測:
1.在96孔板中加入190μl勻漿上清液、10μlO13探針,用移液器吹打,使之充分混勻。
【注】:
● 選做:如有必要,可以做一個陽性對照,勻漿上清加入探針后再加入10μl陽性對照。
2.在37℃避光孵育30分鐘。
3.置于熒光酶標儀中,后于激發波長為488-535nm、發射波長610nm檢測熒光強度。
蛋白定量:
1.另取50μl上清勻漿液,用PBS大約稀釋30倍。
2.取100μl進行蛋白定量。
結果處理:
以熒光強度/毫克蛋白表示組織活性氧強度。

 

產品特點:
● 使用方便:可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測;
● 背景低,靈敏度高;
●線性范圍寬,使用方便。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
儀器:
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計或熒光酶標儀激發波長488-535nm,發射波長610nm。
● 離心機● 移液器● 冰箱● 冰盒
試劑:
● PBS緩沖液(pH7.4,實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液
●或者HBSS(With:Calcium Magnesium Glucose;Without:Phenol Red。)
●蛋白定量試劑
耗材:
● 離心管● 吸頭

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