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青島捷世康生物科技有限公司
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總膽固醇(TC)檢測試劑盒(鄰苯二甲醛比色法)

時間:2020/6/15閱讀:2094
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產品簡介:

膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇,是一種環戊烷多氫菲的衍生物,分子式 C27H46O,

分子量為 3860.65,膽固醇廣泛存在于動物體內,其中腦、神經組織豐富,在腎、脾、皮

膚、肝和膽汁中含量也較高。

      總膽固醇(TC)檢測試劑盒(鄰苯二甲醛比色法)檢測原理是膽固醇及其脂在強酸存在下與鄰苯二甲醛反應,產生紫紅色化合物,該化合物在 550nm 波長處有大吸收峰,分光光度計在 550nm 處進行比色測定,膽固醇含量在 4mg/ml 之內與吸光度呈良好線性關系。本試劑盒用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織等樣本中的總膽固醇含量定量測定,其優點是:1、操作簡便;2、靈敏;3、穩定;4、無需將膽固醇單獨抽提出來或去除樣品中的蛋白質。本試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

  產品組成:

試劑(A): 膽固醇標準(1mg/ml)     1ml 4℃ 避光

試劑(B): TC Assay Buffer            100ml RT

試劑(C): 鄰苯二甲醛粉劑            2×10mg 4℃ 避光

試劑(D): 鄰苯二甲醛稀釋液          30ml RT

使用說明書 1 

自備材料:

1、 蒸餾水

2、 生理鹽水或 PBS

3、試管或離心管

4、 濃硫酸

5、 分光光度計

操作步驟(僅供參考)

1、 樣本處理:

①血清、血漿、腦脊液樣本:從待測樣本中分離出的血清或血漿不應有溶血,直接檢測,如

超過線性范圍,用生理鹽水稀釋后檢測。

②細胞樣本:

a、取適量的細胞(一般推薦>106 以上),1000g 離心 10min,棄上清,留取沉淀。

b、用 PBS 或生理鹽水清洗 1~2 次,1000g 離心 10min,棄上清,留取沉淀。

c、加入 200~300μl  PBS 或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率 300W,每

 3~5s,間隔 30s,重復 3~5 次。亦可手動勻漿,制備好的勻漿液不可離心;亦可用 1~2%

Triton X-100 冰浴 30~60min,制備好的裂解液不可離心。

③組織樣本:準確稱取適量組織樣本,按質量(g):生理鹽水=1:4 的比例,加入生理鹽水,

冰浴條件下手動或機械勻漿,2500~3000g 離心 10min,取上清待用。

2、配制膽固醇標準工作液:按膽固醇標準(1mg/ml):TC Assay Buffer=1:9 的比例準確

混合,即為膽固醇標準工作液(0.1mg/ml),然后按下表依次稀釋膽固醇標準工作液。

加入試劑(ml)/管號                      0     1     2     3     4

膽固醇標準工作液(0.1mg/ml)     0 0.06 0.12 0.18 0.24

TC Assay Buffer                         0.24 0.18 0.12 0.06 0

總膽固醇濃度(mg/ml)                  0     1    2     3     4

3、配制鄰苯二甲醛工作液:取 1 瓶(10mg)鄰苯二甲醛粉劑的準確加入鄰苯二甲醛稀釋液

10ml,充分混勻,即為鄰苯二甲醛工作液。4℃避光保存,2 周有效。

4、配制強酸工作液:取適量的 TC Assay Buffer 和濃硫酸等量混合,即為強酸工作液。注

意:本試劑盒不提供濃硫酸,需用戶自備,二者混合時一定小心操作,以免誤傷自己,配制

好的強酸工作液中的硫酸含量應準確,否則有可能影響顯色效果。

5、膽固醇加樣:按照下表設置空白管、標準管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并注

意避免產生氣泡。

加入試劑(ml)                                空白管 標準管 測定管

蒸餾水                                              0.006 0.006     -

系列膽固醇標準工作液(0~4 號)            -      0.24      -

待測血清或其他樣本                          -          -      0.006

TC Assay Buffer                                     0.24  -       0.24

鄰苯二甲醛工作液                                  0.12   0.12    0.12

強酸工作液                                             2.4      2.4       2.4

6、膽固醇測定:充分混勻, 靜置 10min,1cm 比色杯,以分光光度計測定 550m 吸光度,

以空白管調零,讀取標準管和各待測管的吸光度。

計算:以系列膽固醇濃度(0~4 號)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,作標準曲線,以

測定管的吸光度照標準曲線,求出待測樣本的濃度。

注意事項:

1、 上述低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降。

2、 本法可直接用于檢測腦脊液中的 TC 含量,也可直接檢測尿液中的 TC 含量。

3、 待測樣本如不能及時測定,應置于 2~8℃保存,3 天內穩定。

4、 如果樣本 TC 濃度過高,結果可能呈假性降低,應用生理鹽水稀釋后重測,結果乘以稀

釋倍數。

有效期: 6 個月有效。常溫運輸,4℃保存。

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