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青島捷世康生物科技有限公司
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鏈酶親和素

時間:2020/5/14閱讀:1455
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別名:

鏈酶親和素;鏈霉抗生物素蛋白;鏈霉親和素

介紹:鏈親和素(SA)是阿維丁鏈霉菌(Streptomyces avidinii)表達的一種小分子蛋白。本制品為127AA比較佳核心結構,每分子SA結合4個生物素分子,比活性12~15U/mg。SA與禽類親和素(Avidin,AV)相比特異性更強,與生物素結合后半衰期長達6h,而AV半衰期僅為1h。由于SA不含糖基且等電點接近中性,因此SA在檢測應用中具有比AV更低的非特異性背景。

用途:本制品已廣泛應用于制備SA-偶聯酶制劑(如SA-HRP,SA-AP等),SA-偶聯熒光素(即熒光染料,如SA-FITC,SA-Cy2,SA-Cy3等)、SA-偶聯磁珠等,進而參與酶聯免疫吸附檢測(ELISA)、免疫組化、親和色譜填料、含StrepTagII標簽(8-AA寡肽)的蛋白純化、生物傳感器、生物納米微球、預靶向制藥研究、生物芯片被料等生物技術領域。

優點:高親和力,高偶聯效率。

注意事項:

1.凍干粉溶解后應避免反復凍融,建議分裝成小包裝后分別凍存。

2.凍干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的緩沖體系,若用于包被,酶標可以直接使用。若用于膠體金,調節pH或透析后使用。溶解后立即使用效果比較好,不能4℃長期存放。

3.若用于ELISA包板,膠體金烘金,硝酸纖維素膜上用SA劃線后需要烘干保存,包被液或緩沖液中需加入20%蔗糖作為活性保護劑。

【操作步驟簡述】

一、微孔板包被

1、用碳酸鈉緩沖溶液(pH 9.6)溶解凍干粉,將濃度稀釋成3-10ug/ml(客戶可設定梯度進行實驗)

注意:由于SA等電點是7.4,包被不建議使用中性緩沖液

2、用移液器吸取100ul/孔,4℃過夜包被或者37℃包被2h;

3、洗滌:倒盡板孔中液體,加200ul洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,后將反應板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡,扣干

4、后續進入封閉、洗滌、抗原抗體結合流程

若不立即進入下游實驗,包被板需要進行烘干保存時。包被前,將包被液中加入20%蔗糖作為活性保護劑。

二、SA偶聯磁珠

2.1 NHS 活化

1、充分混勻磁珠后,取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 離心管中,置于磁性分離上,待固液分離后去除上清液;

2、取200μl MES溶液(25mM,pH 5.0)加入到離心管中,置于磁性分離上,待固液分離后去除上清液。重復該步驟1 次; **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 (均為50mg/ml, 以上述MES 配制)到裝有磁珠的離心管中,漩渦混勻使磁珠充分懸浮,室溫下垂直混合30min; **4、反應結束后,加入100μl 上述 MES 溶液洗滌 2 次;(活化狀態不宜長時間保存, 建議立即進行偶聯)

2.2 蛋白偶聯

1、將離心管置于磁性上,分離去除上清液,加入100μl蛋白溶液(25 mM MES,pH 5.0) 輕柔地混勻;(蛋白濃度在0.1-2.0mg/ml)

2、在室溫下垂直混合反應2h,或在4℃條件下垂直混合過夜;

3、反應結束后將離心管置于磁分離架上,磁性分離去除上清液,加入1ml乙醇胺溶液 (3M,pH9.0)洗滌磁珠 2 次;

4、加1ml乙醇胺溶液(3M, pH 9.0)于離心管中,渦旋30s,將離心管置于垂直混合 儀中室溫反應1-2h;

5、反應結束后,將離心管置于磁力架上,待固液分離后移除上清液,然后加入100μl 純化水輕柔渦旋 30s,磁吸分離,重復該步驟 1 次;

6、加入適量的保存液(可根據需要來確定保存溶液的加入量,以調整偶聯配體磁珠的加入適量的保存液(可根據需要來確定保存溶液的加入量,以調整偶聯配體磁珠的濃度)保存于4°,如果固定的生物配體穩定,可以在保存溶液中加入0.02%(W/V)作為抑菌劑。

外觀: 凍干粉

敏感性: 對熱敏感,易吸潮

儲存條件: -20℃

用途: Applications for enzyme-labeled (HRP, AP) streptavidin: Enzyme immunoassays (EIA), including enzyme-linked immunsorbent assays (ELISA) with biotinylated antibodies Cell and tissue staining (for light microscopy) Western blotting (WB) and other membra

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