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青島捷世康生物科技有限公司
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新型冠狀病毒(2019-nCoV)人 IgG 檢測(ELISA)說明書

時間:2020/3/5閱讀:6700
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產品名稱:

通用名稱:新型冠狀病毒(2019-nCoV)人 IgG 檢測(ELISA)試劑盒

英文名稱:Diagnostic kit for human IgG detection of 2019-nCoV (ELISA)

試劑盒簡介:

 本試劑盒以純化的新型冠狀病毒(2019-nCoV)重組蛋白包被酶標反應板,以 HRP 標記的小鼠抗人 IgG1單抗為診斷二抗,構建間接法檢測體系,通過對病人康復期血清中病毒特異性 IgG 的定性檢測,用于現癥病人和既往感染的輔助診斷,亦可通過對病人血清進行稀釋測定抗體滴度。試劑盒用途:

1. 新型冠狀病毒(2019-nCoV)病人的血清學輔助診斷。

2. 新型冠狀病毒(2019-nCoV)流行病學調查。

所需主要儀器:帶 450nm 波長酶標檢測儀、洗板機。

試劑盒組成:

組 份                                               規 格                 數 量              組 份          規 格         數 量
包被有重組抗原的酶標板                96 孔(12×8)      1 塊            顯色液 A        7ml          1 瓶
HRP 標記的抗人 IgG1 單抗工作液      11ml                 1 瓶             顯色液 B      7ml          1 瓶
樣品稀釋液                                         11ml                 1 瓶             終止液          7ml         1 瓶
20 倍濃縮洗液(用前稀釋)               50ml                  1 瓶              封板膜            3 張
陽性對照                                            0.2ml                 1 瓶             試劑盒使用說明書 1 份
陰性對照                                            0.2ml                 1 瓶

操作步驟:

1. 根據樣品數量取出一定量的預包被酶標板并平衡至室溫,每次實驗設陰、陽和空白復孔對照;

2. 首先向板中加入 100μl/管樣品稀釋液,然后向其中加入 1μl 的待測血清,向陰性對照孔加入 1μl 陰性血

清;

3. 空白對照加樣品稀釋液 100μl,陽性對照孔加入陽性血清 100μl

4. 將酶標板用封板膜封閉,置 37℃孵箱中孵育 30 分鐘;

5.  20X 濃縮洗滌液用純凈水稀釋 20 倍(V:V=1:19)為洗滌應用液,注意 4℃儲存易出現結晶,取出待

溶解后再配制成應用液;

6. 取出酶標板置于洗板機上用洗滌應用液洗滌(或者用洗瓶手工洗滌)5 次后,甩干孔內殘留液或倒扣酶

標反應板在吸水紙上拍去孔內殘留液;

7. 于各孔中加入 HRP 標記的抗人 IgG1 單抗工作液 100μl/孔,置 37℃孵箱中孵育 30 分鐘;

8. 重復方法 7

9. 將顯色液 AB 液按 1:1 混合后取混合顯色液每孔加 100μl,輕拍酶標反應板,混勻后置室溫 5 分鐘(要

求計時準確!避光);

10. 于各孔中加入終止液 50μl/孔,輕拍混勻;

11. 將酶標板置于酶標儀 450nm 波長下,測定各孔光吸收 OD 值。

結果判定:

1. 臨界值(Cutoff)計算:陰性對照復孔 OD 平均值應≦0.1Cutoff0.748×陰性對照復孔 OD 平均值+0.146若陰性對照 OD 值平均值為 0,則陰性對照按照 0.05 計算 Cutoff 值。

2. 結果判斷:待檢標本 OD 值>Cutoff 為陽性,待檢標本 OD 值<Cutoff 為陰性。當標本 OD 值介于陰性灰區下沿(其值可按照該公式計算:0.893×陰性對照復孔 OD 平均值+0.113)與 Cutoff之間時,該標本為陰性可疑;反之當標本 OD 值介于 Cutoff 與陽性灰區上沿(其值可按照該公式計算:0.401×陰性對照復孔 OD 平均值+0.248)之間時,該標本為陽性可疑。

注意事項:

1. 診斷試劑盒 4℃冷藏保存,不得長期置于室溫環境中。試劑盒打開包裝后,應盡快使用,若分多次使用,剩余試劑應置于 2~8℃下保存;

2. 注意加樣量的準確性,減少操作引起的結果誤差;

3. 嚴格掌握每次實驗的時間、溫度的一致性;

4. 為防止邊緣效應的發生,整板檢測時要把與板框直接接觸的反應孔空置;樣本數量較少時,反應板條

左右兩側分別放置一條廢棄的板條;

5. 洗板機設置的高度不得大于孔深度,以免造成假陽性;

6. 臨床高度疑似新型冠狀病毒(2019-nCoV),而本試劑盒對血清樣品的檢測結果為陰性,建議 7 天后對

患者再次采血檢測,若仍然為陰性,即可判為無感染;

7. 檢測結果應結合病人臨床癥狀和流行病學史做出綜合判斷,應注意由于感染 OC43 型和 HKU1 等冠狀病

毒而造成的假陽性果;

8. 使用前請閱讀說明書,嚴格按照說明書操作,不同批號試劑盒中各組分不得混用。

本品僅供科研。保存條件:2~8℃下保存

  期:6 個月

 

 

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