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青島捷世康生物科技有限公司
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乳酸含量(lactic acid ,LA )試劑盒說明書

時間:2019/12/17閱讀:2033
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乳酸含量(lactic acid ,LA )試劑盒說明書可見分光光度法

                                               規格:50管/24樣

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關,乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質,在530nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液:液體 55mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 8mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 12mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加入1.2mL蒸餾水充分溶解。

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加12mL蒸餾水充分溶解。

試劑五:粉劑×1 支,4℃避光保存。

標準品:液體 1mL×1 支,4℃保存。

顯色液:臨用前根據用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m)=1:

0.3:3:15(mg)的比例充分混勻。

樣本處理

1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取上清測定。

2. 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于 4℃,12000g 離心10min,取上清測定。

3. 血清:直接測定。

測定操作

 

 

空白管

樣品對照管

樣品測定管

標準對照管

標準測定管

樣品(μL)

 

50

50

 

 

標準品(μL)

 

 

 

50

50

H2O(μL)

500

300

450

300

450

試劑一(μL)

 

150

 

150

 

試劑二(μL)

200

200

200

200

200

顯色液(μL)

300

300

300

300

300

充分混勻,于 37℃反應 30min,于 1mL 玻璃比色皿,空白管調零,測定 530nm 處吸光值,

分別記為 A1,A2,A3,A4,△A 樣=A2-A1;△A 標= A4-A3

測定操作

注意:空白管、標準對照管和標準測定管只需測定一次

計算公式

1. 按照蛋白含量計算

LA 含量(μmol/mg prot)=△A 樣÷△A 標×C 標÷ Cpr

=2×△A 樣÷△A 標÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

LA 含量(μmol/g)=△A 樣÷△A 標×C 標÷ W

=2×△A 樣÷△A 標÷ W

3. 按照細胞數量計算

LA 含量(μmol/104cell)=△A 樣÷△A 標×C 標÷ 細胞數量

=2×△A 樣÷△A 標÷ 細胞數量

4. 按照液體體積計算

LA 含量(μmol/mL)=△A 樣÷△A 標×C 標

=2×△A 樣÷△A 標

C 標:標準品濃度,2mmol/L ;W:樣本質量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL

注意事項

1. 空白管、標準對照管、標準測定管只需做一次。

2. 若吸光值超過 1.2,請進行適當的稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。

3. 低檢出限為 1.8μmol/L。數,500 萬。

 

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