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青島捷世康生物科技有限公司
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SDS 裂解液說明書

時(shí)間:2019/11/22閱讀:1768
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SDS 裂解液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,例如 TritonSDSNP-40 等。SDS 裂解液 (SDS

Lysis Buffer)是一種枀其強(qiáng)烈的細(xì)胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質(zhì)。其裂解液強(qiáng)度大于

NP-40 裂解液、RIPA 裂解液()RIPA 裂解液()、通用細(xì)胞裂解液、Western  IP 細(xì)

胞裂解液,所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等。

SDS Lysis Buffer 主要由 Tris-HClNaClSDS 等組成,并含有多種蛋白酶

抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

產(chǎn)品組成: 

            編號(hào)
名稱

規(guī)格

Storage

SDS Lysis Buffer

100ml

RT

PMSF(100mM)

1.5ml

-20

使用說明書

1份

 操作步驟(僅供參考)

()貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、取 SDS Lysis Buffe 室溫溶解混勻,使用前取適量裂解液加入PMSF,使終濃度為1mM。

2、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,用PBSNS或無血清培養(yǎng)液清洗1次,低速離心,棄上清,

留取沉淀。  

3、按照 6孔板每孔加入150250μl 含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer 

移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液作用于細(xì)胞13s 內(nèi),細(xì)胞就

會(huì)被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃裂解1530min。通常6

孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200250μl

410000~12000g,4℃離心510min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5、進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1、取 SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后,使用前取適量裂解液加入 PMSF,使其終濃度為1mM。

2、低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

3、用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150250μl含有PMSF 的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。通常裂解液作用于細(xì)胞13s 內(nèi),細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 置于冰上或4℃裂解1530min

410000~12000g,4℃離心510min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5、進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()組織樣本

1、取SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,使用前取適量裂解液加入PMSF,使其終濃度為1mM。

2、把組織剪切成細(xì)小的碎片,越小越好。

3、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控

制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

4、按 20mg組織加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂

1530min。如果是所提蛋白樣品用于CHIP,置于冰上或4℃繼續(xù)裂解10~20min。

5、步驟 3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF SDS Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,過程盡量控制在12min之內(nèi),以減少蛋白的降解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃繼續(xù)裂解1020min

610000~12000g,4℃離心510min(如無低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

7、進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

 

注意事項(xiàng):

1、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以用清洗。

2、如果裂解充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減

少裂解液的用量。

3、在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中,如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100 萬細(xì)胞/離心管,然后再裂

解。少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對(duì)比較容易裂解充分。

4、如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈Vortex

使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,

必使用勻漿器,缺點(diǎn)是如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5、溶解SDS Lysis Buffer時(shí),應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間,避免裂解液中的有效成分失效。

6、細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。

有效期:12 個(gè)月有效。

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