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土壤酸性磷酸酶測試盒

時(shí)間:2019/10/30閱讀:1260
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土壤酸性磷酸酶測試盒產(chǎn)品簡介:

    土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響,根據(jù)適pH范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類型。酸性環(huán)境中,S-ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即可計(jì)算出S-ACP活性。

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。用前加50mL蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體×1瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1152μL無水乙醇(自備),48μL蒸餾水充分溶解。(變褐色后不能再使用)

標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1瓶,0.5μmol/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

土壤酸性磷酸酶測試盒操作步驟:

一、粗酶液提取:   

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g,加入0.05mL甲苯(自備),輕搖15min;加0.4 mL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,開始計(jì)時(shí),催化反應(yīng)24h;到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應(yīng)。8000rpm,25℃離心10min,取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟:

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到660nm,蒸餾水調(diào)零。

2.空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL蒸餾水,100μL試劑三,20μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830μL,混勻后室溫靜置30 min,于660nm測定吸光度,記為A空白管。

3.標(biāo)準(zhǔn)管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液,100μL試劑三,20μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830μL,混勻后室溫靜置30 min,于660 nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4.測定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL上清液,100 μL試劑三,20μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水830μL,混勻后室溫靜置30 min,于660nm測定吸光度,記為A測定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

土壤酸性磷酸酶測試盒S-ACP活性計(jì)算: 

活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個(gè)酶活單位。

S-ACP(nmol/d/g)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V總÷W÷T 

=725×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/mL;V總:催化體系總體積,1.45mL;W:土壤樣品質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時(shí)間,24 h=1d。

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