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青島捷世康生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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堿性磷酸酶染色液

時(shí)間:2019/6/12閱讀:1507
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堿性磷酸酶染色液

產(chǎn)品簡介:

     堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi),其活性所需適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

     堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中,該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品

3*10ml

 3*20ml

Storage

試劑(A):ALP固定液

100ml

20ml

RT 避光

試劑(B): ALP 孵育液

B1:AS-BI染色液

3*2ml

5*2ml

-20℃避光

B2:FBB染色液

5ml

10ml

4℃避光

臨用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即為 ALP 孵育液,即配即用。

試劑(C):核固紅染色液

10ml

20ml

4℃避光

使用說明書

          1份

自備材料:

1、載玻片、濕盒

2、顯微鏡

3、4%多聚甲醛固定液(備選)

操作步驟(僅供參考):

1、血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。

2、滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,水洗。

3、入核固紅染色液復(fù)染 3~5min。

4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞,棄液,PBS清洗干凈。

2、加4%多聚甲醛固定10~20min,PBS 清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,PBS清洗。

4、入核固紅染色液復(fù)染0.5~3min。

5、PBS 清洗、鏡檢。

染色結(jié)果:

ALP 活性部位

藍(lán)色

細(xì)胞核

紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)

 

血液、骨髓涂片結(jié)果判斷:

一般以積分報(bào)告結(jié)果,根據(jù)100個(gè)中性粒細(xì)胞陽性顆粒進(jìn)行 0~4+計(jì)分。

細(xì)胞分值

染色特點(diǎn)

0

無顆粒

1

稍有顆粒

2

中等程度顆粒

3

多數(shù)顆粒

4

充滿顆粒

臨床意義:

1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高,未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。

2、急性細(xì)菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正常或減低。

3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS 積分常減低。

注意事項(xiàng):

1、AS-BI 染色液易失效,應(yīng)避免反復(fù)凍融,臨用前低溫緩慢溶解,不可用溫水或熱水助溶。

2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強(qiáng)度,即配即用,不宜久置。

3、血液或骨髓細(xì)胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時(shí)固定,否則會(huì)影響酶的活性。

4、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細(xì)胞。

5、培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液,ALP 固定液更適用于血液或骨

髓細(xì)胞圖片的固定,染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)具體細(xì)胞特性而異。

有效期:12個(gè)月有效。

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