一、組織塊直接培養(yǎng)法
1、取材，用 Hank's 液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。
2、用手術(shù)剪將組織剪切成 1mm3左右的小塊，再用 Hank's 液洗三次。
3、將組織塊轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，并貼附于瓶底面。
4、輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，瓶底朝上，向瓶內(nèi)注入適量的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶放置在
37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
5、放置待組織小塊貼附后，將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放，使組織浸入培養(yǎng)液中（勿

使組織漂起），37℃繼續(xù)培養(yǎng)。

二、消化培養(yǎng)法
1、取材，用 Hank's 液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。
2、用手術(shù)剪將組織剪切成 1mm3 左右的小塊，再用 Hank's 液洗三次。
3、視組織塊量加入酶液，37℃中消化 20—40 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次，或用
吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。
4、加入 3—5ml 培養(yǎng)液以終止酶消化作用（或加入相關(guān)酶抑制劑）。
5、靜置 5—10 分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
6、1000rpm，離心 10 分鐘，棄上清液。
7、加入 Hank's 液 5ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
8、加入培養(yǎng)液 1—2ml（視細(xì)胞量），血球計數(shù)板計數(shù)。

9、將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，37℃下培養(yǎng)。

三、 器官培養(yǎng)
1、將不銹網(wǎng)做成支架形狀，調(diào)整其高度至培養(yǎng)皿的 1/2 深度平面，在其表面放
置 0.5μm 孔徑濾膜。
2、將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)皿中，使液面剛剛接觸到濾膜，但不要使其浮起。
3、將要培養(yǎng)器官組織放在濾膜上，一般厚度不要超過 200μm，水平面積不超過
10mm2。
4、將上述準(zhǔn)備好的培養(yǎng)物放入 CO2培養(yǎng)箱，并加注氧氣調(diào)整氧分壓，最好到 90%。
5、培養(yǎng)過程中要注意觀察培養(yǎng)液平面，盡可能保持在與濾膜一致的水平上。
6、上述可進(jìn)行器官培養(yǎng) 1-3 周，每 2-3 天換液一次，并根據(jù)情況做進(jìn)一步實驗
和檢測。