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Z小抑菌濃度測定試驗（瓊脂稀釋法）
1 原 理
本試驗采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養基中，然后點種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌物質抑制受試菌生長的zui低濃度，即zui小抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）。本方法適用于非溶出性抗（抑）菌產品抗（抑）菌效果的鑒定。
2 實驗材料及器材
（1）實驗菌株 金黃色葡萄球菌 ATCC 6538 ，大腸桿菌 8099或ATCC 11229，可根據抑菌劑的用途，選擇特定的菌株
（2）營養瓊脂培養基，制備后經高壓滅后，置 45℃～50℃水浴備用，此培養基將用于對照試驗
（3）磷酸鹽緩沖液 0.03mol/L，pH7.2
（4）滅菌蒸餾水
（5）加樣器（1μL～10μL）
（6）45℃～50℃水浴恒恒溫培養箱
（7）吸管、試管、平皿
（8）37℃恒溫培養箱
3 操作步驟
（1）抗（抑）菌溶液的配制：以無菌操作取 5mL或 5g（固體研磨后）樣品，放入 45mL 滅菌蒸餾水中，充分振蕩溶解，配成 10% 的均勻分散的溶液或懸液。
（2）抗菌劑稀釋液配制：將已配成 10% 的抗（抑）菌溶液或懸液用蒸餾水做對倍系列稀釋成不同濃度的受試液，置 45℃～50℃ 水浴恒溫備用。
（3）雙倍濃度營養瓊脂培養基：制備后經高壓滅菌后，置 45℃～50℃ 水浴備用，此培養基將用于稀釋抗（抑）菌溶液或懸液。
（4）含抗（抑）菌液培養基的配制：分別取 10mL 系列稀釋的抗菌液加入平皿內。將在 45℃～50℃ 水浴中的雙倍濃度營養瓊脂培養基 10mL，加進平皿內，邊加邊搖晃平板，使抗（抑）菌液和培養基充分混勻。
（5）用加樣器取1μL～2μL（含菌量約為 107
cfu/mL 的PBS溶液）菌懸液點種于含抗（抑）菌液培養基的平皿，接種后所形成的菌液圈直徑約 5mm～8mm（每個點菌量約為 104cfu）。
（6）以同樣方法接種不含抗（抑）菌成分的營養瓊脂平板，作為陽性對照。
（7）將接種后的平板放置 35℃ 恒溫培養箱中，倒置培養 18h～24h，觀察結果。
4 評價規定
菌落生長被*抑制的zui低抗（抑）菌液濃度為該樣品對受試菌的MIC。單一菌落生長可忽略不計。
5 注意事項
（1）接種時，應由低抗（抑）菌劑濃度向高濃度平板依次接種，zui后接種對照平板。
（2）為了保證平板受熱均勻，培養時平板堆放不得超過4個。