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豬肉中喹諾酮類藥物的測定-固相萃取法+LC-MS檢測
本方案建立了以C18固相萃取柱(貨號：9B-T001-06500，描述：SuperClean C18 500mg/6ml, 30支/包)對豬肉樣品中4種喹諾酮類藥物萃取凈化方法，進(jìn)行低中高三水平基質(zhì)加標(biāo)，都能獲得滿意的實驗結(jié)果，回收率介于84%~115%之間，RSD值小于10 %。
一、樣品提取
準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的豬肉樣品2.0 g于干凈離心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min渦旋提取10 min，8000 r/min離心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液復(fù)溶，待凈化。
二、樣品凈化
活化：5 mL甲醇，5 mL水 上樣：上述待凈化液 淋洗：5 mL 10 %甲醇水
洗脫：5 mL 10 %氨水甲醇收集洗脫液，氮吹近干，初始流動相復(fù)溶，上機(jī)。
三、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備
選同類型空白豬肉樣品，按上述前處理方法進(jìn)行操作，取適量的標(biāo)液配制成合適濃度的基質(zhì)曲線。
四、儀器條件
（1）色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色譜柱：菲羅門 Titank C18 3 μm 50*2.1 mm(貨號：FMB-5559-BONU)
流動相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇（0.1 %甲酸）
洗脫方式：梯度洗脫，見表1
流速：0.3 mL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：5 μL
表1 梯度洗脫程序
時間/min | A/% | B/% |
0.00 | 98 | 2 |
0.25 | 98 | 2 |
2.00 | 70 | 30 |
4.00 | 70 | 30 |
4.20 | 30 | 70 |
6.20 | 30 | 70 |
6.50 | 2 | 98 |
7.80 | 2 | 98 |
8.00 | 98 | 2 |
10.00 | 98 | 2 |
（2）質(zhì)譜條件
離子源：HESI
電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：40 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：380 ℃
輔氣溫度：350 ℃
表2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（*為定量離子）
序號 | 名稱 | 保留時間/min | 母離子 | 子離子 |
1 | 馬波沙星 | 3.20 | 363.1 | 320.0*、342.0 |
2 | 培氟沙星 | 3.48 | 334.2 | 290.1*、316.1 |
3 | 達(dá)氟沙星 | 3.92 | 358.2 | 314.1、340.0* |
4 | 二氟沙星 | 4.24 | 400.2 | 299.0、356.1* |
五、實驗結(jié)果
表3 4種喹諾酮類加標(biāo)回收實驗結(jié)果
目標(biāo)物 | 10.0 μg/kg | 20.0 μg/kg | 50.0 μg/kg | ||||
回收率 （%） | RSD（%） n=3 | 回收率 （%） | RSD（%） n=3 | 回收率 （%） | RSD（%） n=3 | ||
馬波沙星 | 88.8 | 8.04 | 107 | 2.72 | 90.7 | 6.19 | |
培氟沙星 | 84.2 | 8.63 | 94.5 | 8.79 | 85.7 | 2.29 | |
達(dá)氟沙星 | 90.9 | 7.94 | 115 | 6.17 | 96.8 | 6.25 | |
二氟沙星 | 91.7 | 7.89 | 107 | 5.29 | 94.4 | 5.01 | |
豬肉中喹諾酮類藥物的測定-固相萃取法+LC-MS檢測
圖1 添加水平為50.0 μg/kg時4種喹諾酮類的總離子流圖
