抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒

產品名稱:：  抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 微量法

產品英文名:  Micro Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit

產品貨號：BC0225           產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/96樣            產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1300
庫存狀態：現貨                          
關鍵字:  抗壞血酸過氧化物酶檢測試劑盒|APX檢測試劑盒|抗壞血酸過氧化物酶|試劑盒

簡要介紹：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負相關性。
    APX催化H2O2氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速率，可計算得APX 活力。


產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體60mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體3mL×1瓶，4℃保存。
產品說明：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負相關性。
APX催化H₂O₂氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速率，可計算得APX 活力。
試驗中所需的儀器和試劑：
低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔UV板、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取 ：   
 稱取約0.1g樣品，加1 mL試劑一，冰上充分研磨，13000g  4℃離心20min，取上清液。
二、測定操作表：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調節波長到265 nm，用蒸餾水調零。
2. 試劑一在25℃中預熱30min以上。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、140μL預熱的試劑一、20μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL預熱的試劑一、20μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10s和130s光吸收A3和A4，△A測定管=A3-A4。
三、APX 活力計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：每克樣品每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g 鮮重) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數為2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；W ：樣品質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：催化反應時間（min），2min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T
=3×(△A測定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：每克樣品每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g 鮮重) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=3×(△A測定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在290m處摩爾吸光系數為2.8×10³ L/mol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.6 cm；V反總：反應體系總體積（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；W ：樣品質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：催化反應時間（min），2min。