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PR1300-如何選購超低分子量蛋白maker
  • PR1300-如何選購超低分子量蛋白maker
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更新時(shí)間:2025-01-04 21:00:06

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如何選購超低分子量蛋白maker
貨號 : PR1300
規(guī)格 : 15T (150 µ1)
保存 : -20℃保存,有效期為一年。

如何選購超低分子量蛋白maker
貨號 : PR1300
規(guī)格 : 15T (150 µ1)
保存 : -20℃保存,有效期為一年。


產(chǎn)品簡介: 
    本產(chǎn)品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成, 分子量范圍為3. 3kD-20. 1kD。 可以用來判斷SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉,每種蛋白含量約為15-22.5ug,配有一支1×上樣緩沖液。


使用說明:
    1. 開封后,溶于150 µ1 1×上樣緩沖液,于95℃水浴5分鐘,可根據(jù)需要進(jìn)行小量分裝,每管10 µl,-20℃貯存,每次取一管使用,避免反復(fù)凍融。
    2. 使用前取分裝后的小管室溫融化后,95℃預(yù)熱5分鐘即可上樣電泳, 用考馬斯亮藍(lán)G-250染色后可見5條蛋白帶(見下示意圖) 。


 

凝膠的配置方法: 

分離膠分離膠分離膠分離膠夾層膠濃縮膠
 20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml
49.5%T 3%C 0.407ml0.160ml
49.5%T 6%C 1.82ml1.50ml1.395ml
凝膠緩沖液1.50ml1.50ml1.50ml0.667ml0.496ml
甘油0.48ml0.48ml0.48ml //
ddH 2 O0.70ml1.02ml1.125ml0.926ml1.344ml
10%APS 40µl40µl40µl20µ|20µ|
TEMED5µl5µl5µl3µl 3µl 


凝膠制備及染色注意事項(xiàng): 
    1. 先配制分離膠,聚合后再配制夾層膠,后配制濃縮膠,3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時(shí),30v跑1-2小時(shí)后,待指示前沿到達(dá)分離膠上沿時(shí),把電壓調(diào)100v,電泳結(jié)束,整個(gè)電泳過程大約需要6-8小時(shí)。
    2. 由于多肽所含的氨基酸數(shù)目較少,因此如該多肽含有過多的極性氨基酸(堿性或酸性),則會影響其在SDS-PAGE 圖上的條帶遷移率,即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。
    3. 由于 SDS-PAGE 的圖譜上,蛋白質(zhì)對數(shù)分子量和遷移率成正比直線關(guān)系的分子量范圍為 15,000-200,000因此對于分子量小于 10000 的蛋白質(zhì)或多肽的分子量,只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量進(jìn)行估計(jì),推斷其是否落入預(yù)測的分子量范圍。
    4. 由于超低分子量多肽(3000 及 3000 以下) ,極易從凝膠上浸出,因此染色及脫色時(shí)間不宜太長,脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過久,否則條帶會消失。
    5. 電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘,再進(jìn)行染色,能得到較好的蛋白條帶;如時(shí)間不允許,也可不進(jìn)行固定直接染色。 如果使用配方7進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性, 請選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(貨號:P1300),該產(chǎn)品具有染色快,無毒,靈敏性高等特點(diǎn),是常規(guī)染色液的替代品。


相關(guān)產(chǎn)品 :

P1015 4× 蛋白上樣緩沖液(含 DTT )
P1016 4× 蛋白上樣緩沖液(含 β- 巰基乙醇)
A1030 10% 過硫酸氨
T1070 5×Tris- 甘氨酸電泳緩沖液
P1300-500  考馬斯亮藍(lán)快速染色


附: 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE 電泳試劑配制
1. 49.5% T 3 % C (配制夾層膠和濃縮膠)
丙烯酰胺 48g
甲叉雙丙烯酰胺 1.5g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
2. 49. 5 % T 6 % C (配制分離膠)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g
用ddH 2 0溶解后定容100ml
3. 凝膠緩沖液
Tris堿 182g
ddH 2 0 300ml
用HCl調(diào)節(jié)pH值8.45
用ddH 2 0定容 500ml
再加入SDS 1.5g
4 . 10×陽極緩沖液(下槽緩沖液〕
Tris堿 121. 1 g
ddH 2 0 400ml
用HCl調(diào)pH值8.9
用ddH 2 0定容 500ml
5. 陰極緩沖液(上槽緩沖液)
Tris堿 12 .11g
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH 2 0定容1000ml
此溶液不用調(diào)節(jié)pH值
6. 固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH 2 0定容100ml
7. 染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考馬斯亮藍(lán)G-250
用ddH 2 0定容500ml

 

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