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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 含酚紅
  • T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 含酚紅
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貨物所在地:北京北京市

更新時間:2025-01-31 21:00:07

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在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)和傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液胰蛋白酶EDTA,其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)水解,使組織或細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是由動物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細胞骨架,打開細胞-細胞,細胞-基質(zhì)之間的連接從而使細胞從培養(yǎng)板上脫落下來并使細胞分散成單個細胞。胰蛋白酶液濃度越高,作用越強,但超過一定限度會損傷細胞。細胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25%,pH為7.2-7.4之間,用濾器過濾除菌。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和,使用后培養(yǎng)瓶要*清洗,否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時間:2-10分鐘。用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用。
使用說明:1、貼壁細胞的消化:貼壁細胞在培養(yǎng)瓶中長成致密單層后,繼續(xù)生長的空間不足,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,同時代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養(yǎng),擴增、傳代。對于懸浮生長細胞和貼壁不太緊的細胞如SP2/0,293等,可直接吹散后分瓶;而對于貼壁較緊的細胞如Hela,HepG2,CHO等,則需要以細胞消化液消化后,才能脫落和分散,擴瓶。一般操作過程為(以下操作均必須嚴格按無菌操作的要求進行):
   (1)將長成致密單層細胞的細胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去; 
   (2)加入0.25%胰酶溶液,視細胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤; 
   (3)一般消化時間約為13分鐘,肉眼觀察瓶底由半透明(細胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為點狀透明(出現(xiàn)細小空隙)時,棄去細胞消化液,并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化,吹打分散;  
   (4)視實驗?zāi)康姆秩攵嗥坷^續(xù)培養(yǎng),一般比例為一傳二到一傳四的。 
2、組織的消化:不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項:1.由于組織或細胞性質(zhì)不同,實驗人員應(yīng)依據(jù)具體情況,確定佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染;
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存,切忌反復(fù)凍融,
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套進行試驗操作。

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