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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測(cè)試劑盒

操作步驟：

一、 粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等體積：直接測(cè)定

二、 測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。

3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL試劑一，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

4. 測(cè)定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A3和A4。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測(cè)試劑盒

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 (1) 按蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W (3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細(xì)胞數(shù)量 (4) 按液體體積計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），5min。 b. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下 1) 按蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr 2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W 3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細(xì)胞數(shù)量 4) 按液體體積計(jì)算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），5min。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測(cè)試劑盒

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過(guò)測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率，即可計(jì)算出GST活性。