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過氧化氫(H2O2)含量檢測試劑盒

H2O2 是生物體內(nèi)常見的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化產(chǎn)生，由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2 可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面 H2O2 也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。 H2O2 與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物，在 415nm 有特征吸收。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、丙酮 100mL、濃鹽酸 5mL、研缽和冰。

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一、 H2O2 提取： 1. 細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；用試劑一定容 1mL；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 2. 組織樣品的制備：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿；轉(zhuǎn)移 EP 管中，用試劑一定容 1mL，8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 3. 血清（漿）樣品：直接檢測。

二、 測定步驟 1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長 415nm，蒸餾水調(diào)零。 2、 將試劑二、三和四 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。 3、在 EP 管中按順序加入下列試劑 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio。。ｃｏｍ試劑名稱（μL） 測定 對照樣本 250 試劑一 250 試劑二 25 25 試劑三 50 50 4000g，25℃離心 10min，棄上清，留沉淀試劑四 250 250 加入試劑四溶解沉淀后，室溫靜置 5min，取 200μL 轉(zhuǎn)移微量石英比色皿或 96 孔板中測定 415nm 處吸光值 A。對照管只要做一次即可。計算 ΔA＝A 測定-A 對照。

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a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下 1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線， y = 0.062x - 0.08 (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/ mL；y 為 ΔA)。 2、血清（漿）中 H2O2 含量的計算： H2O2 含量（μmol/mL）＝(ΔA＋0.08)÷0.062=16.13×(ΔA＋0.08) 3、細(xì)菌、細(xì)胞或動物組織中 H2O2 含量計算（1）按照蛋白濃度計算 H2O2 含量(μmol/mg prot)=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(V1×Cpr)=16.13×(ΔA＋0.08) ÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。（2）按照樣本質(zhì)量計算 H2O2 含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(W ×V1÷V2)=16.13×(ΔA＋0.08) ÷W (3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算： H2O2 含量(μmol/10 )=[(ΔA＋0.08) ÷0.062×V1]÷(500×V1÷V2)=0.032×(ΔA＋0.08) V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。 b. 用 96 孔板測定 的計算公式如下 1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線， y = 0.031x - 0.08 (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/ mL；y 為 ΔA)。 2、血清（漿）中 H2O2 含量的計算： H2O2 含量（μmol/mL）＝(ΔA＋0.08)÷0.031=32.26×(ΔA＋0.08) 3、細(xì)菌、細(xì)胞或動物組織中 H2O2 含量計算（1）按照蛋白濃度計算 H2O2 含量(μmol/mg prot)=[(ΔA＋0.08) ÷0.031×V1]÷(V1×Cpr)=32.26×(ΔA＋0.08) ÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。（2）按照樣本質(zhì)量計算 H2O2 含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA＋0.08) ÷0.031×V1]÷(W ×V1÷V2)=32.26×(ΔA＋0.08) ÷W (3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算： H2O2 含量(μmol/10 )=[(ΔA＋0.08) ÷0.031×V1]÷(500×V1÷V2)=0.064×(ΔA＋0.08) V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。注意：檢測限為 1μmol/mL 或 1μmol/g 鮮重或 10nmol/mg prot