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離心式脫鹽柱的使用步驟
2014-8-25 閱讀(14090)
G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步驟
G-Biosciences Spin-OUT GT-1200，與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似，都是用來代替比較耗時的傳統透析處理，以達到快速純化蛋白/替換蛋白質緩沖液的目的，不過前者是離心式的，后者是重力式的。GT-1200適宜于純化分子量大于12，000的蛋白質，有兩種上樣量規格的：Micro和Medi。沒有現成的使用說明材料，聽朋友介紹這是非常不錯的品牌，在國外很火。感興趣之余啃下其英文說明書了，先了解下其使用步驟：
一、使用前準備：
1.上下顛倒數次，將管中的凝膠懸浮起來，然后100×g離心1min，讓膠體回到管底。這里有兩點需要注意的：1）新的柱子看過去幾乎是透明的，不要認為什么填料都沒有，其實是顆粒太細了；2）離心力是×g，在離心機上顯示的是RCF這個單位，而不是RPM。這兩個單位有本質區別，需要特別留意。其中：
RPM(revolution per minute)為離心機每分鐘的轉數(單位:周/分鐘)；RCF(relative centrifugal force)為相對離心力，以地心引力即重力加速度的倍數來表示，一般用×g表示。 兩者轉換關系如下： RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機轉子半徑(單位:米)。
2.拔掉兩頭的塞子，將柱子放在10ml離心管中，1,000×g離心2min以移除儲存buffer。離心完成后，即可看見白色的填充料。
二、開始使用（交換buffer）
1. 用緩沖液平衡柱子：加入1-2ml緩沖液，將柱子放到10ml離心管中，靜置數分鐘讓緩沖液全部進入柱體后，再重復加入3-5次。zui后以1,000×g離心2min，棄掉收集到的溶液，以保證buffer被全部替換了。
2. 將柱子放到新的離心管中，緩慢加入蛋白質樣品。注意，上樣量為Medi的柱子zui多加入0.5ml樣品，上樣量為Micro的柱子zui多加入0.1ml樣品。樣品加在柱子中間的凝膠上，而不要碰到樹脂部件。加樣結束后靜置1-2min，讓凝膠充分將樣品吸收。
3. 將柱子放到一個新的離心管中，1,000×g離心4min，即可獲得純化好樣品了。
三、柱子的再生
1. 柱子可以重復利用。
2. 需要用到2×蛋白質洗脫buffer，用量是每1ml填料使用1ml buffer。
3. 加入洗脫buffer后靜置5min。
4. 再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子。
5. zui后用30% 的乙醇保存在4℃條件下。
