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臺(tái)式低溫高速離心機(jī)如何提取與制備蛋白質(zhì)
臺(tái)式低溫高速離心機(jī)是實(shí)驗(yàn)室zui常見的*儀器,今天由上海趙迪技術(shù)人員向大家介紹臺(tái)式低溫高速離心機(jī)如何提取與制備蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)樣品制備
秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等(1986)的方法進(jìn)行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚 乙 烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%(丙酮配制,含10mM即0.07%β-巰基乙醇),混勻,-20℃沉淀1小時(shí),4℃,15000r/min離心15min,棄上清,沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巰基乙醇),再于-20℃沉淀1小時(shí),同上離心棄上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。
按每mg干粉加入20μl(可調(diào))UKS液[9.5M尿素,5mM碳酸鉀,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫蘇糖醇),2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc,pH3.5-10),6%TritonX-100],37℃溫育30min,期間攪動(dòng)幾次,28度(溫度低,高濃度的尿素會(huì)讓溶液結(jié)冰)16000r/min離心15min,離心力越大時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)越好!上清即可上樣電泳。或者-70度保存
植物根中蛋白質(zhì)的抽取
(1)sample,液氮研磨
(2)裝1.5mlcentrifuge用tube
(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul
(4)12000rpm,4度,10-15minite
(5)取上層液,蛋白質(zhì)就在里面
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