12
當(dāng)前位置：廣州潔特生物過濾股份有限公司>>技術(shù)文章>>如何利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞傳代操作？
如何利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞傳代操作？
細(xì)胞傳代是指需要將分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)容器內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過程。細(xì)胞培養(yǎng)瓶是細(xì)胞通過過程中的一種常見消耗品。那么這個(gè)具體步驟是什么？
1、從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用酒精噴壺在瓶身表面噴灑75%的酒精進(jìn)行消毒，然后轉(zhuǎn)移到超凈臺上。
2、打開蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量的PBS緩沖液清洗1-2次，然后丟棄PBS緩沖液。
3、用吸管加入1-2毫升胰蛋白酶，并以"十字"方式搖動，使胰蛋白酶充分接觸細(xì)胞。
4、將裝有胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置的顯微鏡平臺上，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化情況。當(dāng)細(xì)胞變圓并大量脫落時(shí)，準(zhǔn)備停止消化，用75%的酒精噴灑瓶子表面，然后轉(zhuǎn)移到超凈臺。
5、用吸管（或巴氏吸管）加入等量的含血清培養(yǎng)基，終止消化。吸管充分吹氣，使細(xì)胞*脫落。
6、將瓶中的混合液體轉(zhuǎn)移到離心管中，平衡并離心約5分鐘。
7、離心后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉(zhuǎn)移到超凈臺上，打開蓋子，將上清液倒入廢液槽。
8、加入適量的含血清的培養(yǎng)基，用吸管吸管輕輕吹打，使細(xì)胞懸浮。
9、將細(xì)胞懸液分成2個(gè)（或更多）清潔消毒的培養(yǎng)瓶，加入適量的培養(yǎng)基，并加蓋。
10、將分裝好的細(xì)胞培養(yǎng)瓶放在倒置的顯微鏡臺上，觀察細(xì)胞。細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)該得到保證。細(xì)胞太少會影響生長。
11、在瓶子上做標(biāo)記，注明通過時(shí)間、細(xì)胞類型、操作者和其他信息。放入培養(yǎng)箱前，再次用酒精噴灑瓶體表面，整理操作平臺，用75%酒精擦拭超凈臺面，清理廢液和垃圾。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶操作時(shí)注意穿戴消毒服、手套和口罩，全程注意無菌操作，避免細(xì)胞污染。