食品合成著色劑，也稱為合成食用色素，是通過化學合成工藝生產的，用于給食品著色的物質。這些著色劑能增強食品的色彩，提高食品的感官吸引力，使食品更加誘人。合成食用色素的使用受到嚴格的法規和標準的約束。在國內，食品添加劑的使用需遵循《食品安全法》及相關國家標準，睿科集團依據GB 5009.35-2023《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》，采用WAX混合型弱陰離子固相萃取柱，整理歸納了全套的解決方案，適用于多基質的檢測應用。
1儀器與耗材
固相萃?。篎otector Plus高通量全自動固相萃取儀
氮氣吹干裝置：Auto EVA80高通量全自動平行濃縮儀
高效液相色譜：（HPLC）Agilent 1260
固相萃取柱：RayCure WAX ，150mg/6mL，30支/盒（RC-204-72823N）
2 樣品制備
2.1 標準工作曲線配置
分別取濃度為50μg/mL的混合標準中間液4μL、10μL、20μL、40μL、100μL于2mL進樣瓶中，用水稀釋至1mL，搖勻，得到標準系列工作液。濃度分別為0.2ug/mL、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、5.0ug/ml。
2.2 樣品提取
準確稱取試樣2g（精確至0.001g），置于50 mL具塞離心管中，先加入適量水（2 mL-5 mL），50 ℃水浴加熱混勻樣品，加入25mL乙醇氨水溶液，渦旋1min，50℃超聲或振搖（速率≥250r/min）提取20min，8000r/min離心5 min，取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入約5 mL-10 mL乙醇氨水溶液重復提取操作至上清液無明顯顏色，離心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液。準確吸取提取液10mL，50℃氮氣濃縮至3mL左右，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作為待凈化液。
2.3 固相萃取凈化條件
(1) 活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化固相萃取柱
(2) 上樣：活化后立即將提取后的待凈化液以2s-3s/滴的流速加載固相萃取柱上
(3) 淋洗：依次用6mL2%甲酸水溶液和6mL甲醇淋洗合成著色劑專用固相萃取柱，棄去淋洗液
(4) 吹干：抽干柱體
(5) 洗脫：用6mL2%-5%氨化甲醇溶液洗脫，分兩次加入，每次3mL，流速低于2s-3s/滴，收集洗脫液
(6) 氮吹：于50℃氮氣濃縮至近干
(7) 復溶：準確加入2mLpH=9的乙酸銨溶液溶解。溶液用0.45μm水系針筒過濾器過濾，棄去2-5滴初濾液，收集后續濾液作為待測液
圖1 食品中合成著色劑檢測
固相萃取法Fotector Plus儀器方法設置
圖2 Auto EVA儀器氮吹參數
3 液相檢測條件
3.1色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm，或同等性能色譜柱
3.2 進樣量：10μL
3.3 柱溫：30 ℃
3.4 二極管陣列檢測器波長范圍：400nm-800nm，檢測波長：
415nm(檸檬黃、喹黃)
520nm(新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和赤蘚紅)
610nm(靛藍、亮藍)
3.5 參考洗脫梯度見表1，其中流動相A為20mmol/L乙酸銨溶液，流動相B為甲醇
表1 參考洗脫梯度表
3.6 譜圖
圖3為415nm，520nm，610nm波長下，11種合成著色劑標準品（1μg/mL）譜圖
圖3
4方法可行性驗證
為了驗證該方法的回收率，本實驗向冰紅茶飲料樣品（2g）中加入上述11種食品中合成著色劑標準品（200μL，50μg/mL），進行加標回收驗證。測試結果如下表所示。11種食品中合成著色劑的回收率在71.96-98.94%之間，RSD 值在0.39-6.15%之間。
表2 冰紅茶飲料中11種合成著色劑的
加標回收率及RSD值（%）
圖4為415nm，520nm，610nm波長下，冰紅茶飲料樣品加標（1μg/mL）譜圖
圖4
5 實驗小Tips
5.1 樣品提取過程中，注意提取液乙醇氨水盡量臨用現配。
5.2 小柱使用前活化后讓柱體保持濕潤，上樣后調整流出速度，使其保持在2-3秒/滴，過快不利于目標化合物保留。
5.3 氮吹、復溶、過膜。經凈化后，洗脫液需要50℃水浴氮吹，氮吹過程中需注意控制氮吹時間，以防樣品被完全吹干，否則復溶會相對困難。復溶液需要調pH為9，復溶液pH會影響靛藍的穩定性和赤蘚紅的回收率。濾膜的選用也需謹慎，在使用前請考察濾膜是否吸附色素。
6儀器優勢特點
01
經樣品處理后的提取液利用 Fotector Plus 全自動固相萃取儀進行凈化，告別樣品量多和人為操作的煩惱。
02
凈化完的洗脫液通過Auto EVA全自動平行濃縮儀對其進行濃縮，此過程無需樣品轉移，便可直接對其進行濃縮，其設計大大減少了樣品損失。
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