12月8日早間，“女子接觸霉變玉米后肺部長滿真菌"沖上熱搜第一。據(jù)人民網(wǎng)，一23歲女子前段時間回老家?guī)兔κ沼衩祝潞筮B續(xù)1個多月咳喘不止。經(jīng)醫(yī)生檢查，她的肺部長滿了黃曲霉菌，引發(fā)了真菌感染。該女子回憶，當時她在無防護措施情況下收玉米，有些玉米可能淋雨霉壞。[1]
什么是黃曲霉毒素？
黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。當糧食未能及時曬干及儲藏不當時，往往容易被黃曲霉或寄生曲霉污染而產(chǎn)生此類毒素。在各類食品中，花生、花生油、玉米污染最嚴重。黃曲霉毒素是一種劇毒的致肝癌物質，人攝入大劑量的黃曲霉毒素后可出現(xiàn)肝實質細胞壞死、膽管上皮細胞增生、肝脂肪浸潤及肝出血等急性病變。
事實上，世界范圍內有多次黃曲霉毒素急性中毒事件，非洲的霉木薯餅中毒，印度的霉玉米中毒，肯尼亞黃曲霉玉米污染事件……所以把食物中的黃曲霉毒素控制在安全值以內，也是各國都在嚴格把關不敢松懈的事兒。[2]
怎么鑒別食物中是否黃曲霉毒素超標？
首先是快速識別，黃曲霉毒素是很苦的，食用花生、核桃等食物時如果感覺很苦，馬上吐出來，并漱口。
此外，睿科集團建立了Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀測定玉米、大米和花生油中黃曲霉毒素B族和G族的分析方法，供廣大食品檢測客戶參考。試樣經(jīng)過70%甲醇水溶液提取，提取液經(jīng)離心、稀釋后用含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱自動凈化。用20mL水淋洗柱子將免疫親和柱上的雜質除去，以甲醇洗脫免疫親和柱。將洗脫液在50℃條件下氮吹干，用1mL初始流動相定容，經(jīng)高效液相色譜儀上機分析。
圖-1.4種黃曲霉毒素的結構式
下文參考GB5009.22-2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中第三法，采用免疫親和柱凈化，高效液相色譜檢測，建立了復雜糧油樣品基質中黃曲霉毒素高靈敏度的前處理和分析方法，得到四種常見糧油樣品中黃曲霉毒素的加標回收率在83-100%之間，RSD值小于5%。
1.標準曲線配置
使用睿科Auto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)標準品的全自動化配置，可將購買的混合標液（1000ug/L）通過工作站的直接稀釋模式，配置成濃度為10ug/L的工作中間液，緊接著可通過程序設置，吸取該工作液，配置一條濃度分別為0.5ug/L，2.0ug/L，5.0ug/L，25ug/L和100ug/L的標準工作曲線。
圖-2. Auto Prep 200 液體工作站配標程序
2.樣品提取與前處理
花生油樣品前處理
準確稱取5g花生油樣品于50mL離心管中，加入20mL甲醇-水溶液（7:3）（v/v），渦旋震蕩提取20min，以7000r/min的轉速離心5min，取4mL上清液于80mL玻璃上樣管中，加入23mL 0.1%吐溫-20的PBS緩沖液混勻，待用。
（此處以花生油樣品前處理為例，玉米粉、大米樣品操作步驟同上）
固相萃取凈化條件
表-1 固相萃取凈化條件
以2mL/min的速度精確上樣27 mL待測液，10mL水潤洗樣品瓶，10mL水淋洗免疫親和柱，氣推30mL吹干免疫親和柱，推速為80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5mL/min的速度洗脫樣品，收集洗脫液用睿科Auto EVA-60全自動平行濃縮儀于50°C、2psi條件下氮吹干，用初始流動相定容至1mL，過濾膜上機分析。詳細步驟見圖-3。
圖-3. Fotector Plus 黃曲霉毒素免疫親和凈化方法
3.樣品測試
油樣加標測試
取空白花生油樣5g，添加2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的標準品，進行上述步驟的前處理凈化，樣品回收率如下表-2所示：
表-2添加水平為2ug/kg花生油樣的回收率
大米樣品加標測試
大米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結果：
表-3添加水平為2ug/kg大米的回收率結果
玉米樣品加標測試
玉米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結果：
表-4添加水平為2ug/kg玉米的回收率結果
4.注意事項
由于黃曲霉毒素在紫外光照射下不穩(wěn)定，因此在實驗過程中應該避免紫外光和太陽光的照射。
谷物中離心完成后，不可放置過長時間，否則谷物容易重新吸水，可能導致提取液的濃度過高，使樣品的回收率偏高，影響測試結果。
固相萃取進行提取液凈化前，特別對于偏酸或偏堿性樣品，應用PBS緩沖溶液（pH=7.4）進行稀釋后上機，否則可能會導致回收率偏低。
5.總結
標液配制
凈化
濃縮
點擊圖片，了解儀器詳情
本文采用Auto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)混標、標準曲線的配置，全程無需人為值守，讓實驗人員遠離有毒有害特別是黃曲霉毒素這樣的劇毒化學物質，保護身體健康。
Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀能同步凈化6個樣品，連續(xù)自動處理60個樣品，做樣通量高；同時可無人值守，減少工作量。此外還可避免工作人員因操作失誤導致的檢測偏差，以及將實驗人員更迭對檢測結果的影響最小化。
Auto EVA-60全自動平行濃縮儀處理通量高，60個樣品可同時進行氮吹，實驗平行性好；采用氮吹針自動追隨液面的設計，無需手動調節(jié)氮吹針且耗氣量小，省時省力。
本解決方案快速高效，且無需人員值守，讓實驗人員遠離黃曲霉毒素等有害化學物質且提供工作效率。
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參考資料：
[1]《熱搜第一！女子接觸霉變玉米后肺部長滿黃曲霉菌，什么是黃曲霉毒素，它有哪些危害？》人民網(wǎng)人民數(shù)據(jù)
[2]《“食藥安全 科學生活"食品篇之黃曲霉毒素的前世今生》廣州市黃埔區(qū)人民政府
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