RetroBeads™逆行熒光示蹤劑
產(chǎn)品描述：
Lumafluor公司 RetroBeads™ 是逆向示蹤領域的原裝微球，也是經(jīng)實驗驗證高效可靠的微球產(chǎn)品。綠色和紅色熒光 RetroBeads™ 僅由 Lumafluor 供應。穩(wěn)定、可靠的逆向示蹤，唯有Lumafluor RetroBeads™ 是您的優(yōu)選。
Lumafluor RetroBeads™ 核心優(yōu)勢：
1）高度精準注射—特別適用于精細神經(jīng)連接研究
2）胞內(nèi)長期穩(wěn)定存在（> 1年）且無毒副作用
3）兼容性強：可與多數(shù)順行示蹤劑、原位雜交及免疫組化技術聯(lián)用
操作流程：
【產(chǎn)品說明】
1.包裝形式：蒸餾水懸浮濃縮液。
2.紅色微球：
1）可直接使用或稀釋。
2）大鼠視覺皮層實驗顯示1:4稀釋不影響標記效果。
3）初次實驗建議使用原液。
4）可用蒸餾水或標準鹽溶液（NaCl/KCl）稀釋。
3.綠色微球
1）即用型制劑
2）禁止稀釋
【儲存條件】
1.冷藏保存于加濕容器中（防蒸發(fā)）
2.嚴禁冷凍（會導致持久性失效）
3.干燥后不可復溶
4.正確儲存條件下有效期可達數(shù)年
【注射方法】
1.推薦方式：
1）壓力注射（如1mL漢密爾頓注射器）
2）局部神經(jīng)環(huán)路：30-50納升（30-50μm玻璃微量注射器）
3）常規(guī)逆行示蹤：0.1-0.3微升（大口徑針頭）
2.擴散特性：
1）注射點擴散范圍<1mm
2）大范圍標記需多點注射
3）不推薦電離子透入法（微珠帶凈負電荷）
【存活時間】
1.溫血脊椎動物：
1）最短有效標記時間：24小時
2）48小時內(nèi)標記強度遞增，此后保持穩(wěn)定。
2.冷血動物：建議初始存活時間設為1周。
3.最長存活期：未明確，但14個月后標記仍穩(wěn)定，推測為持久性標記。
4.無毒性：未發(fā)現(xiàn)對動物或神經(jīng)元的毒性效應。
【固定與處理】
1.標準固定流程：
1）0.1 M磷酸緩沖液沖洗
2）4%多聚甲醛（0.1 M磷酸緩沖液，pH 7.4）固定
2.避免戊二醛：會引發(fā)組織自發(fā)熒光，干擾標記（綠色微球在戊二醛固定后不可見）。
3.切片處理：
1）冰凍切片收集于磷酸緩沖液，貼附于明膠包被載玻片，空氣干燥。
2）充分干燥后，二甲苯透明1分鐘，封片（推薦Fluoromount或Krystalon）。
4.注意事項：
1）短時間（<5分鐘）接觸酒精或二甲苯無害，但長時間會破壞微球。
2）嚴禁甘油：微球?qū)Ω视兔舾校瑫焖偻噬筛挠盟畻钏峒柞ィ?/span>
3）避光保存時，標記可穩(wěn)定1年以上（但背景熒光可能增強）。
4）塑料包埋后無法保留標記。
【觀察方法】
1.紅色微球：
染料為羅丹明，適用任何羅丹明熒光濾光片（部分舊款尼康濾光片背景較高，推薦蔡司或徠卡標準濾光片）。
2.綠色微球：
適用寬波段熒光素濾光片（窄波段信號較弱，Lucifer Yellow濾光片背景較高）。
3.抗光漂白：長時間觀察或顯微攝影無明顯褪色。
4.鏡頭選擇：
1）低倍干鏡（如4×、10×）通常無法清晰觀察標記。
2）推薦使用10×油鏡（NA ≥ 0.4）或更高倍鏡，25×油鏡可顯著提升綠色微球標記的清晰度。
3）實驗失敗判斷前，請用油鏡檢查注射位點附近切片（應存在大量局部標記細胞）。
綠色微球特別提示
1.年齡影響：
幼年動物標記轉(zhuǎn)運效率更高，組織自發(fā)熒光更低，建議優(yōu)先選用。
2.降低自發(fā)熒光：
1）使用更薄切片（如30 μm而非40-50 μm）。
2）選用幼年動物。
3）封片后盡快觀察（背景熒光隨時間增強）。
產(chǎn)品訂購：
品牌 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
Lumafluor | Red Retrobeads | 100ul |
Lumafluor | Red IX Retrobeads | 100ul |
Lumafluor | Green IX Retrobeads | 100ul |
更多產(chǎn)品信息，請垂詢Lumafluor中國區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。
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