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rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶

產品描述

重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內表現出更好的穩定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性，嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30°C時可達到*活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30°C的廣泛范圍內皆有活性（見表1），使得反應條件的選擇可根據目的蛋白的情況而靈活變動。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His標簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達到純化目的蛋白的目的。

表1. 不同溫度下rTEV酶切活性

影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響；2）Zn離子（＞5 mM）對rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。

rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶

產品性質

產品組分

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。

收到產品后，請將rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2置于-20 ºC保存，一年穩定。對于rTEV Protease，短期使用，可置于-20 ºC保存，6個月穩定；長期使用，請置于-70℃保存，一年穩定。強烈建議收到貨或者*次使用時將各組分分裝保存，特別是rTEV Protease，以及rTEV Buffer 2（1000×），避免反復凍融。

應用實例

• 在EP管中配制如下反應體系，

【*】：取適量的rTEV Buffer 2（1000×）做10倍稀釋到rTEV Buffer 2（100×），再根據以上體系加量。

2. 30℃孵育，在1、2、4、6小時分別吸出30 μl上述反應液，置于單獨的EP管中。

3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。

4. 樣品全部反應完畢后，樣品煮沸5 min，取40 μl進行SDS-PAGE分析。確定*反應時間。如融合蛋白要求低溫處理，可將反應液置于4℃，請延長反應時間，并增加rTEV酶用量。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。