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上海信帆生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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基質(zhì)金屬蛋白酶/明膠酶譜法試劑盒
ELISA試劑盒
干擾物質(zhì)
血清及相關(guān)類(lèi)產(chǎn)品
生化法試劑盒
實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)項(xiàng)目
質(zhì)控品/校準(zhǔn)品
RIA免疫檢測(cè)
品牌生化試劑
檢測(cè)試劑盒
抗體和抗原
胰島素(Insulin)試劑盒
補(bǔ)體蛋白試劑盒
腫瘤壞死因子elisa試劑盒
白介素Elisa試劑盒
化學(xué)溶液
檢測(cè)試劑
GIBCO培養(yǎng)基
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染色試劑
試劑
生化指示劑
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
科研用二抗
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生物試劑
染色液
科研細(xì)胞
生化試劑
生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)
細(xì)胞因子及重組蛋白
合成多肽

脫氫抗壞血酸含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

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脫氫抗壞血酸(dehydroascorbate ,DHA )含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
AsA 作為植物細(xì)胞一個(gè)重要生理指標(biāo),其 AsA 的含量、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA 比率)及其
合成與代謝相關(guān)酶類(lèi)活性的變化涉及植物對(duì)一系列環(huán)境脅迫的響應(yīng)。DHA 是 AsA 的可逆的
氧化型,在生物體內(nèi),與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng),具有電子受體的作用。
測(cè)定原理:
DTT 還原 DHA 生成 AsA,通過(guò)測(cè)定體系中 AsA 的生成速率,即可計(jì)算出 DHA 含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體 50 mL×1 瓶,室溫保存。
試劑二:液體 40 mL×1 瓶,室溫保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 10mL 蒸餾水充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 瓶, 4℃保存。臨用前加入 5.743 mL 蒸餾水充分溶解;吸取 0.1 mL 上述
溶液,加入 0.9 mL 蒸餾水,混勻,即為 100μmol/L DHA。
樣品中 DHA 提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,
加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心 20min,取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議
500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,
總時(shí)間 3min);12000g,4℃離心 10min,取上清液置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。
DHA 測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 265 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:依次在 1mL 石英比色皿加入 100μL 標(biāo)準(zhǔn)液、800μL 預(yù)熱的試劑二和 100μL 試劑
三,迅速混勻后于 265nm 比色,記錄 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2,△A 空白管=A2-A1。
4. 測(cè)定管:依次在 1mL 石英比色皿加入 100μL 上清液、800μL 預(yù)熱的試劑二和 100μL 試劑
三,迅速混勻后于 265nm 比色,記錄 10s 和 130s 的吸光值 A3 和 A4,△A 測(cè)定管=A4-A3。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式:
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式:
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
DHA(nmol/mg prot) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷(Cpr×V 樣)
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
DHA(nmol/10 4 cell) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V 樣÷V 樣總)
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
DHA(nmol/mL) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 標(biāo)準(zhǔn)]÷V 樣
=100×△A 測(cè)定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)液:100μmol/L;V 標(biāo)準(zhǔn):加入反應(yīng)體系中標(biāo)準(zhǔn)液體積,0.1mL;V 樣總:上清液總體
積,1.0 mL=0.001 L;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1mL;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項(xiàng):
1. 臨用前配制的試劑未使用完的 4℃保存,3 天內(nèi)使用完。
2. 低檢出限為 10μmol/L。

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