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應用大爆發：2024上半年Incucyte® 國內成果盤點!
Incucyte® 實時活細胞分析系統是一款革命性的細胞成像設備，可以實現培養箱內連續數小時、數周乃至數月的長時程連續觀察。其“傻瓜式”的實驗設置和分析，以及精準的各種細胞指標計算，使得很多用戶對其愛不釋手，在細胞水平的體外實驗中有著廣泛應用。
無需多言，讓論文數量證明一切！在2024年上半年，陳老師收集到了近50個單位發表的逾70篇國內論文（文獻列表在文末哦！）。
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圖1. 2024上半年Incucyte® 文章第一作者單位分布
從論文的分布單位來看，許多單位在半年內就發表了多篇論文，例如華西醫院、北京大學第三醫院、北京協和醫學院等。足以說明因為其簡單易用，短時間內能生成多個精確數據，是發文章的利器！
圖2. 2024上半年Incucyte® 文章應用分布
Incucyte® 的應用種類也變得更加廣泛。使用Incucyte® 可以幫助研究人員高效地獲取實時的細胞信息，從而不會錯過任何細節。從這些發表的論文來看，除了傳統的細胞增殖活性和劃痕遷移實驗外，還有細胞黏附、克隆形成、吞噬等多種應用。此外，還有溶酶體酸度、鈣離子檢測、EV（外泌體）攝入等新應用。
外泌體攝入[1]
急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是一種常見的危及生命的綜合征，目前尚無有效的治療藥物。內皮細胞衍生的細胞外囊泡（EC-EVs）在ALI/ARDS的發展中起著至關重要的作用。該篇文章證明了在敗血癥中循環EC-EV的數量增加，通過靶向單核細胞并將其重新編程為促炎巨噬細胞，從而加劇肺損傷。生物信息學分析和進一步的機制研究表明，膿毒癥期間在EC-EV上過表達的VCAM1通過與單核細胞表面相互作用來激活NF-κB通路，從而調節單核細胞分化。ARDS 患者的 VCAM1 EC-EV 數量顯著增加。這些發現不僅揭示了膿毒癥相關ALI/ARDS的新機制，還為其精準治療提供了潛在的新靶點和策略。Incucyte® 用來觀察EV攝入，每30分鐘拍照一次，連續監測12小時。
圖3. 單核細胞對EV的攝入：正常內皮細胞產生的 EV 被稱為“N-EC-EV”，而用 LPS 刺激的內皮細胞產生的 EV 被稱為“L-EC-EV”，兩者都用綠色熒光標記；可見，單核細胞選擇性地攝入L-EC-EV
EV攝入過程相對較快，使用Incucyte® 可以高頻率非干擾地連續拍攝，不會錯過每個細節。歡迎點擊了解Incucyte®全新推出外泌體檢測試劑盒。
線粒體膜電位[2]
結腸癌是全球最常見的惡性腫瘤之一。天然產物為開發更有效、毒性更小的抗癌藥物提供了有希望的途徑，擴大了臨床治療武器庫。在這項研究中，從Melia azedarach L.的果實中分離出一種三萜類化合物（EHMT），對結腸癌細胞具有顯著的抑制活性，同時對正常細胞無毒性。EHMT有效抑制了HCT116細胞系的集落形成，并誘導了細胞凋亡和細胞周期停滯。此外，EHMT 促進了活性氧（ROS）的產生和線粒體膜電位的去極化。值得注意的是，EHMT 通過激活 HCT116 細胞中的 JNK 信號通路觸發 ROS 介導的細胞凋亡。這些發現使EHMT成為治療結腸癌的潛在候選藥物，為對抗這種可怕的疾病提供了新的希望。Incucyte® 用來測試線粒體膜電位的去極化。
圖4. Incucyte® 拍攝JC-1染色后的HCT116細胞（在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體，可以產生綠色熒光）；由此可見，EHMT濃度越高，線粒體膜電位越低（線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件）
Incucyte® 有強大并且使用簡單的軟件分析，可以準確計算各種參數
粘附測試[3]
循環腫瘤細胞（CTC）簇在癌癥轉移中起著關鍵作用。建立一種可靠的體外方法學模型，以形成生物學特性與臨床CTC簇非常相似的CTC簇。本文系統地優化了培養方法，形成了體外CTC簇模型，并對其生物學能力對其進行了評估。體外CTC簇模型與腫瘤轉移不同階段患者分離的CTC簇的病理特征具有高度相似性，包括CTC簇的外觀形態、大小、粘附等指標。該研究提供了一個可靠的模型，有助于在體外獲得相對穩定和合格的CTC簇，推動腫瘤轉移的研究。Incucyte® 用來檢測CTC簇的粘附。
圖5. Incucyte® 檢測CTC的粘附：可以看到CTC簇比單個細胞更容易延伸和粘附，E圖是根據20h細胞面積的計算結果
Incucyte® 照片也很清晰地看到單個細胞的形態
賽多利斯還提供CTC挑取神器
——全自動無損細胞分離系統
溶酶體酸度[4]
糖尿病相關性牙周炎（DP）表現出嚴重的炎癥和對常規牙周治療的抵抗。本文研究了DP患者牙齦上皮細胞（GECs）高炎癥反應的潛在機制—高糖條件下溶酶體功能障礙導致自噬通量阻塞，加劇了GECs的炎癥反應。GECs的單細胞RNA測序和免疫組織化學分析顯示，DP患者溶酶體通路失調，其特征是溶酶體相關膜糖蛋白2 (LAMP2)和ATP6V0C(一種ATP酶)水平降低。此外，ATP6V0C缺乏的GECs表現出自噬受損和炎癥反應增強，反映了高糖刺激的效果。該發現強調了溶酶體損傷在DP自噬阻塞中的關鍵作用，可能為開發針對DP的有效治療策略鋪平道路。結合溶酶體特異性指示劑，通過Incucyte®系統檢測酸度變化趨勢，連續監測48h。
圖6. Incucyte® 結果：在高血糖微環境下(左圖)或者ATP6V0C敲低（右圖）情況下，對人牙齦上皮細胞(GECs)進行體外刺激，Incucyte® 結果顯示溶酶體酸度降低，自噬被阻斷
只要有合適的活細胞染料，萬物皆可以使用Incucyte® 表征
為什么Incucyte® 那么火熱呢？
培養箱內無限時間的連續觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害和視野移動
6個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數
> 100種優化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的Protocol
論文>16,000篇，認可度高
一句話：您只需放好細胞，其他就交給Incucyte® 吧！