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上新了·Octet！解鎖新技能，輕松玩轉AAV定量
腺相關病毒 (Adeno-associated viruses, AAV) 作為一種基因遞送工具，具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂細胞和非分裂細胞，能介導基因的長期穩定表達等優點，是目前基因治療中的載體，包括天然型（AAV）和重組型（rAAV）在內多種血清型。常用的AAV血清型有AAV1，2，5，6，7，8，9，rh10等，不同AAV血清型具有不同的衣殼蛋白空間結構，由于其組織特異性（或親嗜性）不同而被廣泛應用。
圖1. AAV載體療法占在研病毒載體基因療法的約80%
圖2. 不同血清型組織遞送特異性
AAV關鍵質量屬性評估之病毒顆粒數
2022年5月，國家藥監局藥審中心發布《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》通告，病毒顆粒數是重要的質量分析指標之一。全新推出的Octet® AAVX腺相關病毒定量生物傳感器（貨號：18-5160），消除目前定量方法通量低、成本高、耗時長的技術瓶頸，一鍵解鎖各類血清學AAV病毒衣殼定量！
AAV定量痛點
為提高AAV病毒載體的質量和產品，需要在多個工藝步驟中快速定量AAV濃度，來高效地優化生產工藝環節
目前的方法費時費力費錢，速度慢，難以優化
時效性差，流程復雜。客戶需要將樣品送到分析部門或實驗室檢測，等待2~5天才會有結果。工藝流程需要等待結果進行下一步工作開展或優化調整
Octet® AAVX定量解決方案
基于藥典認可的生物層干涉（BLI）技術
Octet® R8/RH16/RH96高通量分子互作平臺
5分鐘即可一次性檢測8/16/96個樣品
AAVX生物傳感器，一步法直接定量純化或粗樣品
可結合各種血清型：AAV1 ~ AAV9及AAVrh10
線性范圍寬廣：8.5×108 ~ 1×1013 vp/mL
可再生重復使用~20次，單個樣品檢測成本更低
Octet® BLI Discovery v.13.0.1 軟件預設AAV定量模板
特異性高，動態范圍廣
Octet® AAVX傳感器對AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAVrh10等10種不同的AAV血清型具有良好特異性。
圖3. Octet® AAVX對10種AAV血清型的特異性結合
大多數血清型的動態范圍在8.5x108至1.0x1013 vp/mL之間，線性范圍跨越5個數量級，無論高滴度和低滴度樣品都能得到準確測量。且動態范圍內測試的所有濃度均觀察到良好的回收率 (80–120%) 和精密度 (CV<10%)。
圖4. 使用Octet® AAVX生物傳感器對純化的AAV9衣殼定量
輕松消除基質干擾，粗樣品表現優異
AAV的整個生產流程會用到不同的緩沖液和培養基基質，Octet® 對純化樣品和粗制樣品均表現出優異的處理能力。使用樣品稀釋劑緩沖液對粗樣品進行4倍至10倍稀釋，即可顯著減輕樣品中基質效應。
圖6. 使用Octet® AAVX生物傳感器對AAV9粗樣品衣殼定量（含 1% Pluronic F-68的裂解緩沖液，稀釋比例3:1；n=3）。結果顯示濃度為3.05x109–2.22x1012 vp/mL。樣品回收率在95–105%之間，并且受測濃度具有良好的精密度（CV<10%）。
與ELISA相關性
Octet® BLI搭配AAVX傳感器可以實現快速的檢測設置、分析和實時數據顯示，從而能夠監控和優化每個檢測步驟。為了證實Octet® AAVX檢測法和ELISA之間的相關性，來自BridgeBio Pharma和REGENXBIO公司的研究人員在AAV生物工藝流程的不同步驟測試了樣品中的不同AAV血清型。
圖7. 使用Octet® AAVX生物傳感器和ELISA定量檢測純化樣品及粗制樣品（生物工藝中間體）中的AAV8和AAV9，數據顯示兩種方法具有良好的相關性。數據由REGENXBIO Inc.提供。
圖8. 使用Octet® AAVX生物傳感器和ELISA定量檢測AAV生產上游和下游不同步驟中的AAV5（包括純化樣品及粗制樣品）滴度。滴度范圍為6.73x109至9.59x1013 vp/mL，證明Octet® AAVX檢測法與ELISA之間具有良好的相關性。數據由BridgeBio Pharma, Inc.提供。
簡單便捷，全面優化
方法 |
Octet® AAVX |
ELISA Kit |
ddPCR |
*與Octet® AAVX對比
總結
基于Octet® BLI 和Octet® AAVX 生物傳感器的AAV定量檢測策略可廣泛應用于AAV 上游和下游工藝各階段，優化傳統終點法耗時費力的確定，提供可靠、準確且便捷的AAV定量新思路。
下載《用于AAV衣殼快速直接定量的Octet® AAVX生物傳感器》應用指南，了解詳細實驗操作