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產品信息

產品描述

Exosome（外泌體）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質雙分子層結構，存在于細胞培養上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中。Exosome攜帶有多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。

本試劑盒采用*的分離技術，可以快速從細胞培養上清中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細胞共培養、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應用。

產品組分

運輸和保存方法

室溫運輸，本試劑盒可于室溫穩定保存24個月。

注意事項

1）為了確保獲得的外泌體是來自于您的細胞，最好使用無外泌體的血清進行培養。

2）如果想要進一步純化外泌體，可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化。

3）產品只針對細胞培養上清來源的外泌體分離，不適用血清/血漿中外泌體的抽提，如果需要進行血清/血漿的外泌體分離，請選用血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5）本產品僅作科研用途！

操作方法

樣品制備：

收集細胞培養基至15mL離心管中，3000×g，離心10 min；小心收集上清，并轉移至新的離心管中（勿破壞沉淀），于冰上放置待用。

【注】若收集的細胞上清不能及時使用，可先放置于-20℃或-80℃冷凍。使用時，于25℃水浴鍋中解凍，*溶解后置于冰上待用。

外泌體分離：

1）試劑準備：使用前請將外泌體抽提試劑充分混勻。

2）上清預處理：吸取10 mL細胞培養上清，加入2.5 mL外泌體抽提試劑（41205-A），渦旋振蕩混勻1 min，再放置于2℃至8℃靜置2h；

【注】上述用量的推薦，僅針對外泌體分泌量高的腫瘤細胞，對于外泌體分泌量少的樣品（例如干細胞）可以適當加大上清的用量。其它規格的細胞上清可以根據外泌體抽提試劑的用量進行等比例換算。

3）外泌體沉淀：取出裝有混合液的離心管于4℃，10000×g離心60 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清）。

4）外泌體重懸：取100 μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物，使其充分混勻，并轉移至新的1.5 mL離心管中；

【注】外泌體顆粒會附著在管壁上，重懸時可以使用PBS對管壁進行反復吹打洗脫（避免劇烈吹打）。重懸用的PBS的量可以根據細胞上清的量進行等比例增加，也可以根據可能獲得的外泌體的量進行適當的增加或者減少。

5）外泌體的洗滌：將含有外泌體的1.5mL離心管于4℃，12000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液。

外泌體純化

1）純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗制品轉入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃，3000g離心10 min，收集管底的液體，即為純化后的外泌體顆粒。

2）外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，分裝后于-80℃ 長期保存，避免反復凍融。

外泌體濃縮（可選）：

如果獲得的外泌體濃度比較低，可以使用密理博3kD孔徑的超濾管于4℃，14000×g離心10-30 min，內管中即為純化后的外泌體顆粒。

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細胞共培養，可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內做梯度摸索，選擇一個較為合適的條件。

HB220107