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在高通量測序技術日新月異的當下，small RNA（涵蓋 miRNA、siRNA、piRNA 等）研究已然成為探索生命調控奧秘的關鍵領域。而基于T4 RNA連接酶的建庫技術，作為small RNA研究的核心環節，卻長期受兩大技術難題困擾：
①連接效率欠佳：傳統T4 RNA連接酶對短鏈RNA適配性不足，極易產生接頭自連等副產物，致使文庫出現嚴重偏好性；
②末端偏好性顯著：普通酶易受RNA二級結構或末端修飾影響，從而導致數據偏差。
圖1.傳統T4 RNA連接酶在small RNA建庫中的應用流程示意圖[1]
如今，T4 RNA連接酶2截短型（T4 RNA Ligase 2, truncated，T4 Rnl2tr）的問世，改寫了small RNA建庫技術格局。該酶能夠特異性催化5′端預腺苷化的DNA/RNA與RNA 3′-OH末端的連接反應。其在于無需ATP參與，不過必須搭配5′端預腺苷化接頭使用。當它與T4 RNA ligase 1協同運作時，可實現打斷RNA的直接接頭連接，有效遏制接頭串聯和自連現象，大幅提升測序文庫的構建質量。
圖2.T4 Rnl2tr聯合T4 RNA ligase 1在small RNA建庫中的應用流程示意圖[2]
在此，我們向您推介翌圣生物全新研發的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）。這款酶作為T4 Rnl2tr的雙點突變體（R55K, K227Q），在保持高效連接活性的同時，極大程度降低了RNA的非特異性連接問題，諸如 RNA 串聯或自連成環等情況，堪稱small RNA 3'端接頭連接和cDNA文庫構建的選擇。
目前，翌圣生物已成功構建起完備的T4 RNA連接酶產品矩陣，包括T4 RNA ligase 1、T4 RNA ligase 2和T4 RNA ligase 2, truncated KQ，滿足您多樣化的科研需求。其特點及應用見下表：
性能展示
翌圣T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）
切割活性，媲美進口品質
使用翌圣和來自進口Supplier A*的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分別按照不同投入量加入體系中對31 nt的ssRNA底物（Substrate 1）和17 nt預腺苷化的ssRNA底物（Substrate 2）進行連接實驗。結果表明，翌圣產品能高效連接 ssRNA 底物，連接效果與進口產品不相上下。
圖3.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ連接效果驗證
無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留
將200 U T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明，翌圣的3個批次T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ均未檢測出核酸外切酶、切口酶或RNase 殘留，為您的實驗結果準確性與可靠性保駕護航。
圖4.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果
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活動細則：
1、活動時間：即日起-5月15日；
2、活動名額有限，每位客戶限一套。
參考文獻：
[1] Raabe C A , Thean-Hock T , Juergen B ,et al.Biases in small RNA deep sequencing data[J].Nucleic Acids Research, 2014(3):1414-1426.DOI:10.1093/nar/gkt1021.
[2] Sorefan K , Pais H , Hall A E ,et al.Reducing ligation bias of small RNAs in libraries for next generation sequencing[J].Silence, 2012, 3(1):4-4.DOI:10.1186/1758-907X-3-4.
