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上新 | T4 RNA Ligase 2,環狀RNA研究核心酶原料

2025-2-25  閱讀(181)

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近年來,隨著RNA研究的不斷深入,線性RNA分子在生物學研究和治療開發領域展現出廣泛的應用潛力,例如mRNA疫苗。然而,長鏈線性RNA較短的半衰期限制了其有效性。環狀RNA (circRNA)是一類單鏈閉合的環狀RNA分子,與線性mRNA相比,circRNA具有穩定性高、免疫原性低、表達持久等優勢,已經成為下一代RNA療法賽道的新秀。circRNA體外環化技術是研究的關鍵,目前,RNA的體外環化主要通過化學合成和酶促連接(分為T4連接酶法和核酶法)兩種方法實現。

 

在眾多技術路線中,基于T4連接酶法的技術路線備受關注。該技術路線主要涉及到T4 DNA Ligase 1、T4 RNA Ligase 1以及T4 RNA Ligase 2這幾種關鍵酶。值得注意的是,不同的T4連接酶在功能方面存在著顯著的差異,這種差異決定了它們各自適用于不同結構的RNA連接任務。其中,T4 RNA Ligase 2在對雙鏈RNA缺口進行連接時,展現出了高的連接效率。

圖1. T4連接酶作用原理比較[1]

 

T4 RNA Ligase 2,是一種依賴于ATP的雙鏈RNA連接酶(double-strand RNA ligase, dsRNA Ligase),具有RNA鏈分子間和分子內連接活性,可連接雙鏈RNA中的切刻,也可用于連接雙鏈結構中RNA 3′羥基與DNA 5′磷酸基的切刻。與T4 RNA Ligase 1相比,該酶對雙鏈RNA切刻的連接活性要明顯高于對單鏈RNA的末端連接。

 

T4 RNA Ligase 2能夠通過三步反應將相鄰的3′羥基與5′磷酸多核苷酸連接起來,其機理如下:

①連接酶與ATP反應形成酶-AMP復合中間體;

② AMP脫離酶-AMP復合體,與RNA的5’-磷酸結合,形成5’端腺苷化的RNA;

③ 5’端腺苷化的RNA與3’-OH連接形成磷酸二酯鍵,釋放AMP。

 

圖2.T4連接酶結構與作用機理[2][3]

 

基于T4 RNA Ligase 2在RNA連接中的性能,翌圣生物隆重推出T4 RNA Ligase 2 (Cat#14652),為您的分子生物學研究提供更高效、更穩定的工具。

 

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產品名稱

貨號

規格

目錄價

活動價

T4 RNA Ligase 2

14652ES80

1000 U

535元

0元

 

 

活動細則:

1、活動時間:2025年2月12日-2025年2月28日

2、活動名額有限,每位客戶限一套。

 

 

翌圣T4 RNA Ligase 2(Cat#14652) 性能展示

 
01

連接活性強

將Yeasen和進口Supplier N*的T4 RNA Ligase 2按照不同投入量加入體系中對dsRNA底物進行連接,結果顯示其能有效連接dsRNA底物,連接效果與進口Supplier N*相當。

 

圖3. T4 RNA Ligase 2連接效果驗證
注:20 μL反應體系中包含終濃度為20 μM的dsRNA連接底物

 

02

無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留

將100 U T4 RNA Ligase 2分別與核酸底物一起孵育,瓊脂糖凝膠電泳比較譜帶變化。結果顯示翌圣3個批次的T4 RNA Ligase 2均無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留。

 

圖4. T4 RNA Ligase 2核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果

 

 

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產品定位

產品名稱

貨號

質粒線性化

BspQI GMP-grade

10664ES

Bsa I GMP-grade

10661ES

模板去除

DNase I GMP-grade

10611ES

體外轉錄

T7 RNA Polymerase GMP-grade

10625ES

Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade

10620ES

Murine RNase inhibitor GMP-grade

10621ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

RNA環化

T4 RNA Ligase 1

14651ES

T4 RNA Ligase 2

14652ES

RNA純化

RNase R GMP-grade

14615ES

 

參考文獻:

[1]Obi P, Chen Y G. The design and synthesis of circular RNAs[J]. Methods, 2021, 196: 85-103.
[2]Easey A. Synthetic Biology Methods to Optimise T4 RNA Ligase Activities[D]. University of East Anglia, 2018.
[3] Viollet S, Fuchs R T, Munafo D B, et al. T4 RNA ligase 2 truncated active site mutants: improved tools for RNA analysis[J]. BMC biotechnology, 2011, 11: 1-14.

 



 


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