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原代細胞概念、培養步驟、污染預防
原代細胞（Primary cells）指采用酶、螯合劑或機械方法直接從活體組織或器官中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到成功傳代之前的細胞稱為原代細胞；但考慮到原代細胞可在體外分裂10~15次的特性，以及取材難度大、分離和培養成本高等因素，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞。
原代細胞離體時間短且未經修飾，與體內狀態相似度高，生物學特性未發生很大變化，仍保持了細胞在體內的許多重要標志和功能。因此，相比較于細胞系而言，通過原代細胞所獲取的實驗數據與體內生理功能更接近、更能真實反映體內環境。
在生物醫學研究中，原代細胞更適合用于藥物測試、細胞分化和轉化等實驗，而且還可以有效避免涉及動物實驗方面的倫理爭議。在生物制藥方面，原代細胞也是理想的細胞模型，可用于疾病機制研究、藥物篩選、藥物代謝和毒理學研究等。
原代細胞的完整培養可分為6個步驟：取材、組織分離、細胞過濾和計數、接種和培養、傳代與維持、凍存和復蘇。
原代細胞對外界環境非常敏感，實驗環境的細微變化都可能影響細胞的存活和功能。因此，需要嚴格控制上述實驗的環境條件，保證在無菌環境中進行操作，還要控制溫度、濕度和二氧化碳濃度等，從而確保細胞活力和最佳的培養效果。
在原代細胞培養過程中，很容易引發微生物污染，如：取材階段，由于是從人類或動物組織中分離的，因此易攜帶共生菌群和亞臨床感染等常見的微生物污染源。故在組織獲取、組織解離和細胞培養等環節，均普遍采用抗生素防污染。常用的抗生素包括青霉素、鏈霉素、慶大霉素、兩性霉素B、氨芐青霉素和卡那霉素等。但不建議長期使用抗生素，因為某些試劑（如兩性霉素B）從長期來看可能對細胞有毒；并且不同抗生素會對細胞的代謝、增值、分化，甚至是基因表達都有不同程度的影響。
原代細胞抗生素的應用
已知，抗生素的使用，雖然能預防原代細胞污染，但也引入了新的問題。因此，既能確保原代細胞不受污染，又對細胞毒害性小的抗生素就成了迫切需求。不僅如此，細菌、真菌、支原體等的污染也是影響原代細胞生長和發揮正常功能的因素，對細菌、真菌、支原體污染可有效預防，也是原代細胞對所需抗生素的硬性要求。
為此，翌圣生物自主研發了Antimicrobia Agent for Primary Cells原代細胞抗生素，其是用于原代細胞培養，無菌過濾，淡黃色溶液，儲存液濃度為50 mg/mL，推薦使用濃度為100-300μg/mL。
該原代細胞抗生素是一種廣譜抗生素制劑，旨在保護原代細胞免受微生物污染。原代細胞細胞模型很容易受到來自宿主動物或細胞分離過程中的自然菌群污染。本產品能夠提供全面的微生物污染預防。它對革蘭氏陽性菌（例如芽孢桿菌和葡萄球菌屬）和革蘭氏陰性菌（例如大腸桿菌，腸桿菌、銅綠假單胞菌和不動桿菌）、支原體和真菌都有抑制作用。
翌圣生物的原代細胞抗生素可提供的保護原代細胞，當它作用于微生物污染時，具有最小細胞毒性。本產品由多種抗生素組成，其中三種作用于支原體、革蘭氏陽性和革蘭氏陰性這些化合物靶向DNA旋轉酶和原核生物核糖體亞基（30S和50S），因此阻斷DNA和蛋白質分別合成。其它成分可以除真菌，包括酵母菌等。
產品特點
廣譜防污染：可以預防細菌、真菌（包括酵母菌）、支原體等微生物污染；
強普適性：適用于原代細胞培養、類器官培養、干細胞培養等；
多應用場景：可在細胞培養全過程中使用（如培養基、清洗溶液等）；
低細胞毒性：對細胞毒性小，可保護原代細胞的活性和正常生長。
實驗數據
通過抑菌實驗，測定原代細胞抗生素體外抑制微生物生長效力。其中，翌圣原代細胞抗生素和競品A的使用濃度分別為33、50、100μg/mL。然后將稀釋好的不同濃度梯度的原代細胞抗生素溶液和提前配制好的細菌真菌懸液混合，接種于培養基中。在適宜的溫度和濕度條件下進行培養。觀察并記錄細菌真菌的生長情況，判斷原代細胞抗生素對細菌真菌的生長抑制情況。根據下述結果，可以看出，翌圣生物的原代細胞抗生素較競品A，有更好的抑菌效果。
圖1.原代細胞抗生素對細菌真菌的抑菌圈實驗
翌圣生物的原代細胞抗生素處理細胞后，分別使用CCK-8和細胞計數的方式對細胞活力和增殖情況進行檢測：從下圖可以看出加入原代細胞抗生素，對細胞活力和細胞增殖幾乎無影響。
圖2. 原代細胞抗生素加入前后細胞活力和細胞增殖情況圖
產品信息
類別 | 產品 | 貨號 | 品名 | 規格 |
微生物污染預防 | 原代細胞抗生素 | 40613S | Antimicrobial Agent for Primary Cells 原代細胞抗生素 | 1mL/5mL/10mL |
支原體預防試劑 | 40608ES | MycAway™ Prophylactic (2000×) -Mycoplasma Prevention Reagent |
1mL/5×1mL | |
支原體噴霧 | 40605ES | MycAwayl™ Spray (Ready-to-use) | 500mL/2×500mL/10×500mL | |
培養箱支原體 污染預防 | 40609ES | MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator | 100 mL | |
水浴鍋支原體 污染預防 | 40610ES | MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath | 100 mL | |
微生物污染檢測 | 支原體檢測 | 40601ES | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit | 10assays/20assays |
40612ES | MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit | 25T/100T | ||
40614ES | GMyc-PCR Mycoplasma Detection Kit (2G) | 10assays/20assays | ||
40619ES | MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit （2G） 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）（2G） | 25T/100T | ||
微生物污染清除 | 支原體去除 | 40607ES | MycAwayl™ Treatment (1000×) - Mycoplasma Elimination Reagent MycAwayl™支原體去除試劑（1000×） | 100μL/1mL/5×1mL |
