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多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)也稱復合PCR，由Chambehian'于1988年提出。其基本原理與常規PCR相同，區別在于多重PCR反應體系加入一對以上引物，各對引物分別結合在模板相對應部位，最終擴增出一條以上目的DNA片段。而多重PCR建庫技術是一種整合多重PCR及高通量測序的靶向測序技術。該方法具有成本低、檢測效率高、應用靈活、適應性廣等特點，在病原微生物檢測、遺傳病/腫瘤突變檢測、植物分子育種等研究中都有廣泛的應用。
多重PCR建庫技術一覽
多重PCR建庫技術在微生物檢測中的應用
病原tNGS
微生物多樣性檢測
16S rRNA擴增子測序技術是微生物群落多樣性檢測常用的組學技術之一，該技術無需對微生物分離培養，直接提取樣本里面所有微生物的基因組，利用合適的通用引物擴增16S rDNA/18S rDNA /ITS等高變區或其他功能基因，采用高通量測序儀Miseq、Hiseq或Novaseq對其進行測序，通過生物信息學分析可以獲得特定實驗樣品中細菌、真菌或古菌等的物種組成、物種豐度、系統進化、群落比較等諸多信息。
多重PCR建庫技術在動植物檢測中的應用
品種鑒定
植物分子育種
在傳統植物育種中，遺傳變異是通過視覺選擇進行鑒定。隨著分子生物學的發展，分子標記輔助育種解決了傳統利用表型篩選的作物育種方式成本高，周期長，費時費力的問題，逐步從“經驗育種"走向“精確育種"。基于多重PCR和基于目標區域基因組序列液相捕獲精準定位SNP/INDEL基因型分型測序技術，將位點選擇高靈活性、樣品數量靈活性、高通量、高靈敏度、低成本多項優勢有效結合，實現對全基因組上特定基因位點變異的高通量靶向篩查。
遺傳多樣性分析
多重PCR靶向捕獲測序可用于對植物種群中的遺傳多樣性進行分析。通過選擇性引物捕獲特定基因組區域并對多個樣本進行測序比較,可以研究不同品種或種群中的遺傳差異和多態性,為植物種質資源的保護和利用提供重要的分子標記信息。
動植物病蟲害檢測
多重PCR技術可以針對多種植物病原真菌、細菌、病毒、線蟲等進行靶向檢測，對病害的流行預警、溯源和防控管理等具有重要作用。
多重PCR建庫技術在疾病研究及相關檢測中的應用
遺傳病檢測
腫瘤基因檢測
臨床腫瘤基因檢測主要有家族遺傳性腫瘤檢測（檢測胚系基因突變）、腫瘤組織體細胞基因突變檢測（腫瘤分子分型、用藥指導等）、游離DNA基因突變檢測（腫瘤動態監測，耐藥評估等），腫瘤樣本靶向NGS分析的建庫方法主要有兩種：雜交捕獲法和擴增法。泛生子一步法擴增建庫技術（中國發明ZL201710218529.4)，利用特定引物通過一步PCR擴增，結合生物信息算法分析，可檢測多種類型的變異信息，包括點突變、小片段插入/缺失、拷貝數變異、基因融合變異、甲基化修飾和RNA表達量變化等。除用于多種靶向藥基因突變進行同時鑒定以指導用藥之外，對于微量DNA信號的特異性放大能力在cfDNA檢測及血液腫瘤治療后微小殘留病（MRD）的鑒定等領域也具有極大的優勢。
多重PCR建庫技術多領域賦能，滿足不同應用的檢測需求。翌圣多款多重PCR建庫產品滿足眾多客戶的不同需求，助力多重PCR建庫技術大顯身手！
應用 | 產品類別 | 產品名稱 | 貨號 | 備注 |
病原tNGS | 逆轉錄 | Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Kit | 12249ES | 常規逆轉錄 |
Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Mix | 12958ES | 逆轉錄預混液 | ||
多重PCR預混液 | 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix | 12948ES | - | |
一步法RT-PCR | Hieff® Multiplex RT-PCR Kit | 12950ES | - | |
微生物檢測 | 16S 檢測 | 16S（V3-V4）Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina | 12983ES | 16S V3-V4 |
Hieff NGS® Multiplex Long PCR Master Mix | 17228ES | 16S全長擴增 | ||
遺傳病檢測 | 多重擴增預混液 | 2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR預混液 | 13283ES | - |
分子育種檢測 | 多重擴增預混液 | 2×Hieff® C2P4 Blood Direct Multiplex PCR Master Mix | 13606ES | - |
腫瘤突變檢測 | 多重擴增預混液 | 5× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶預混液 （for multiplex PCR） | 10137ES | - |
