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2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四價HPV疫苗上市申請獲得NMPA受理，這也是國內自研 四價的預防因人乳頭瘤病毒所引起的宮頸癌疫苗。根據國家癌癥中心基于腫瘤登記及隨訪監測最新數據，在JNCC上發布2022年中國惡性腫瘤疾病研究情況顯示【1】，子宮頸癌位列女性癌癥發病人數的前五位，發病增長率僅次于甲狀腺癌，因此防治需要同時進行，以減少病人發病率和延長存活期。
圖.信息源自CDE
宮頸癌類器官（organoids）是指利用宮頸腫瘤細胞等在體外培養出的3D細胞培養物并具有一定的空間結構組織類似物。宮頸癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統2D疾病模型，其在闡明疾病的發展、穩態性和發病機理等與體內環境更加接近，能作為宮頸癌治療、診段和發病機制研究的理想試驗模型。
宮頸癌類器官構建實驗步驟
1、取材：標本離體后，盡快取材。采用無菌器械，保證無菌環境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉運；
2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復清洗后，去除 PBS；
3、重復清洗：重復第 2 步驟 3 次；
4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養皿中，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）；
5、重復清洗：使用常溫PBS，重復第2步驟3次；
6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過70 μm篩網，收集宮頸癌細胞；
7、紅細胞裂解：加入10 mL紅細胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min；
8、重復清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復第 2步驟3次；
9、類器官種板：調整細胞密度為2~3×106，與基質膠1:1均勻混合，將細胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預熱的類器官培養液，每個孔 750 uL；
10、類器官培養：將培養板放在 37℃ CO2培養箱培養,每2天更換培養液。加入培養液時，吸頭朝向側壁，緩慢加入；
11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數量、增殖速度、形態、微生物污染情況等。
實驗結果
注：P為代次，d為培養天數
FAQ
基質膠的操作要注意哪些事項？
所有操作需在無菌環境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本，如何避免污染？
①取材時盡量保證無菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集、保存、運輸注意事項
盡可能多采集腫瘤細胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運轉至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內送到）。
病灶和癌旁培養出的類器官有區別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別，腫瘤本身具有異質性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現象，從形態上看，原發病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結構，一般病灶形態上更加不規則一些。如果希望在建模或藥物篩選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。
產品選擇
產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
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低生長因子 | Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
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鼠尾膠原 | Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I | 40125ES10/50 | 2/10 mL |
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