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Human細胞應用及其殘留DNA質控
基因與細胞治療產品，通常會使用含有工程化基因構建的載體或遞送系統，對人體細胞的遺傳物質DNA進行基因修飾、改變基因的表達方式或調節細胞生物特性，以達到治療的目的。
當宿主細胞為Human來源時，載體系統在宿主細胞內完成擴增后，通過裂解宿主細胞、分離純化，收集得到高純度的載體系統。收集到的溶液中除載體系統外，還有Human宿主細胞的殘留DNA。
殘留DNA風險及法規監管要求
國家藥品監督管理局藥品評審中心（CDE）發布的關于基因治療產品指導原則中明確指出需對DNA殘留量和殘留片段大小進行控制，建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。
ICH Q9中也強調，對于不同的細胞系根據其來源和遺傳背景來確定宿主DNA的測試：
●通過降低生物活性來減少宿主細胞來源的DNA的致瘤性和感染性風險；
●通過降低宿主DNA含量，減小DNA片段的大小至功能基因大小（目前的證據表明為200bp）以下；
●在終產品中需要檢測宿主DNA的含量和片段大小分布情況；
●如果使用到DNA清除，降解或者失活的方法，則需要方法學驗證。
Human細胞作為宿主細胞，同樣適用于這一要求。根據法規要求，應對中間產品、半成品及成品中的Human殘留DNA進行檢測，確保殘留的DNA片段大小和數量低于風險要求。
殘留DNA檢測方法
《中華人民共和國藥典》2020年版第三部規定，外源性DNA殘留檢測采用DNA探針雜交法、熒光染料色法和定量PCR法。目前市場上對宿主細胞殘留DNA檢測，主要采用熒光探針qPCR方法，qPCR法具有靈敏度、序列特異性和準確性，可為生物制藥工業在工藝研究和成品質量控制方面提供可靠的檢測手段，現也已成為各生物制品廠家檢測方法。
翌圣生物自主研發的Human宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒（Human Host Cell DNA Residue Detection Kit），經驗證可用于GMP體系下的生物制品中Human基因組DNA殘留檢測，并作為放行質量標準。依據藥典與法規的方法學和標準進行的驗證結果表明，翌圣生物Human HCD Kit匹配且優于專屬性、準確性、精密度、標曲線性、耐用性等檢測標準，定量范圍為30fg/μL~300pg/μL。該試劑盒可快速準確定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中Human殘留DNA殘留量。還研發了與Human殘留DNA檢測試劑盒配套使用的宿主細胞殘留DNA樣本前處理試劑盒，以及配套的自動化核酸提取儀器。
Human殘留DNA檢測Kit產品性能
靈敏度高：檢測下限可低至10 fg/μL；
準確性高：DNA參考品與國家標準物質標曲基本無偏差，檢測值CV＜5%；
精密度高：重復性CV值＜10%，好于行業標準（15%），中間精密度＜15%；
專屬性強：不同細胞系間無交叉反應；
定量準確：配套專屬磁珠法樣本前處理試劑盒；
操作時間短：3小時內完成全部檢測流程；
穩定性好：多次反復凍融擴增效率仍較高，-20℃可儲存2年。
產品信息
產品 | 貨號 | 名稱 | 規格 |
樣本前處理試劑盒 | 18461ES | MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（瓶裝） | 25T/100T |
18462ES | MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒FA（預封裝） | 2×16 T/6×16 T | |
核酸提取儀器 | 80501ES01 | Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A全自動核酸提取儀 | 32通量 |
殘留DNA檢測試劑盒 | 41325ES | Human Host Cell DNA Residue Detection Kit Human宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒 | 50T/100T |
41326ES | Human Host Cell Residue DNA Size Analysis Kit Human Human宿主細胞殘留DNA片段分析試劑盒 | 50T/100T |
