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T5 Exonuclease是一種沿5'→3'方向降解DNA的核酸外切酶。它既能從DNA 5'末端起始消化，也可以從線性或環狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化，但不會降解超螺旋雙鏈DNA。可應用于無縫克隆（同源重組克隆）、降解堿裂解提取質粒中的變性DNA等。
圖1. T5 Exonuclease原理圖
切割：T5 Exonuclease從DNA片段的5'端切割一條鏈，產生DNA 3'突出末端。之后互補的DNA片段同源末端進行退火配對結合，形成一個有間隙的環狀DNA；
填補：Phusion DNA高保真DNA聚合酶通過DNA合成填補間隙，產生一個只有缺刻的環狀DNA；
連接：Taq DNA連接酶通過形成磷酸二酯鍵修復缺刻，得到一個完整的雙鏈DNA，也就是完整的環狀質粒。
圖2. 無縫克隆原理圖[1]
翌圣T5 Exonuclease(Cat#14538ES)由翌圣鎂孚泰生物ZymeEditor酶進化平臺經過重組表達獲得，無切口酶殘留，應用于無縫克隆，陽性克隆率可達100%！
應用到無縫克隆，陽性克隆100%
使用T5 Exonuclease進行無縫克隆，分別連接2、3、4個片段，實驗結果表明，翌圣T5 Exonuclease運用到無縫克隆中，陽性克隆率可達100%（12/12）。
圖3. 無縫克隆效果圖
無切口酶殘留
將30 U不同批次的T5 Exonuclease分別與相應的底物DNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測結果表明，翌圣T5 Exonuclease無切口酶殘留。
圖4. 切口酶檢測
應用場景 | 產品名稱 | 產品貨號 |
Gibson組裝 | T5 Exonuclease | 14538ES |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 | 10153ES | |
Taq DNA連接酶 | 11051ES | |
無縫克隆 | Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit | 10922ES~10923ES |
質粒抽提 | MolPure® Endo-free Plasmid Mini Kit 無內毒素質粒小量提取試劑盒 | 19021ES |
