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近年來， RNA二代測序技術成為生命進展和疾病診斷等領域的重要研究手段。但是，不同來源的樣本中的RNA種類占比具有極大的不均一性，如正常細胞中核糖體rRNA約占總RNA的90%?95%，血液中珠蛋白的mRNA約占總mRNA的76%以上，這些RNA的存在占據了大部分的測序數據，嚴重影響到低豐度RNA的檢測，提高了測序的成本。
圖1.人類組織/細胞RNA組成分布
因而在轉錄組學研究中，rRNA的去除，對于實現RNA經濟高效的測序至關重要。
目前國內主要以RNase H酶消化法為主，特別對于部分RNA降解樣本（如FFPE樣本）RNA酶消法更能展現其優勢。
圖2. rRNA去除（RNase H酶消化法）
翌圣生物自主研發的一步靶RNA去除快速技術可以在RNA建庫過程中快速去除不需要的rRNA和珠蛋白RNA，整個過程只需要3 min，一步操作。產品包括Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（一步法快速rRNA去除試劑盒）和Hieff NGS® One-Step Globin RNA Removal Kit（一步法快速珠蛋白RNA去除試劑盒）。
圖3. 逆轉錄阻礙探針法去除rRNA原理示意圖
一步靶RNA去除快速技術的原理是利用強結合能力的逆轉錄阻礙探針優先封閉靶RNA，阻止逆轉錄酶通過逆轉錄阻礙探針鎖定的靶RNA位點，從而達到在逆轉錄過程中去除靶RNA的目的。
圖4.逆轉錄阻礙探針法在NGS建庫過程中快速去除靶RNA原理示意圖（僅需3min）
◎ 操作簡單（僅需一步加樣操作）
◎ 耗時3 min（無需額外的純化操作）
◎ 對非靶RNA保留完整、特異性強、效率高和基因檢出數高
圖5. 不同rRNA去除方法操作時間對比
圖6. 不同起始量RNA樣本中rRNA去除效率對比
【注】：為了獲得更好的建庫產量，我們建議1-100ng RNA投入量使用12259，100-1000ng RNA投入量使用12258。
圖7. 不同質量度RNA樣本去除效率對比；左（DV200=70%）, 中（DV200=43%），右（DV200=12%）
圖8. 不同去除rRNA方法的基因檢出數比較
翌圣生物逆轉錄阻礙探針法獲得了國家知識產權局的發明zhuan利授權。任何在逆轉錄過程中利用逆轉錄阻礙探針混合物去除靶RNA的方法都應屬于本zhuan利的保護范圍。
圖9. 發明zhuan利證書
產品名稱 | 產品貨號 | 產品規格 |
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（Human, 100-1000ng） | 12258ES08/24/96 | 8/24/96T |
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（Human, 1-100 ng） | 12259ES08/24/96 | 8/24/96T |
Hieff NGS® One-Step Globin mRNA Removal Kit | 12260ES08/24/96 | 8/24/96T |
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