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雙熒光素酶報告基因檢測系統
——更簡便、更靈敏、更準確
自1990年螢光素酶生物傳感器技術誕生，時至今日，螢光素酶報告基因的檢測系統被廣泛應用于細胞信號通路、siRNA/miRNA、免疫應答、藥物篩選等研究。螢光素酶報告基因檢測系統中具有代表性的是螢火蟲螢光素酶報告基因和海腎螢光素酶報告基因，由于兩種酶底物和發光顏色的區別，且在動物體內無內源性表達，使其在單、雙報告實驗中得到廣泛應用。
螢火蟲螢光素酶是一種胞內蛋白，大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下，催化底物螢火蟲螢光素氧化，生成氧化螢光素，并發出黃綠色光，其*發光波長為560nm。
海腎螢光素酶也是一種胞內蛋白，大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素，氧化生成高能產物coelenteramide，并發出藍光，其*發光波長為465nm。
對于螢光素酶的化學發光與檢測模式上存在以下差異：
? 化學發光根據發光的形式和種類分為閃光型（flash-type）與輝光型（glow-type）兩種類型；
? 在檢測方法上分為非均質檢測與均質檢測；
那么在螢光素酶檢測實驗中如何進行報告基因檢測試劑的選擇呢？接下來讓我們一探究竟~
1 閃光型與輝光型差異
2 非均質型與均質型差異
? 非均質型
優勢：可留樣檢測（裂解液可保存用于后續檢測）；劣勢：操作繁瑣。
? 均質型
優勢：操作簡單（裂解檢測僅需一步）；劣勢：不可留樣檢測。
需求 | 信號靈敏度高(例如低表達) | 需求信號半衰期長（穩定性） |
需留樣檢測 | 非均質法閃光型（貨號：11401、11402） | / |
無需留樣檢測 | / | 均質法輝光型（貨號：11404、11405） |
好啦！以上說了這么多，相信大家已經明確了自己的需求啦~
翌圣生物提供“非均質法閃光型"和“均質法輝光型" 螢光素酶檢測試劑，大家可以根據單、雙螢光素酶報告基因進行選擇~
1 非均質閃光型報告基因檢測（貨號：11401、11402）
? 產品特點
裂解能力更強：能夠*裂解絕大部分種類細胞。
信號更強：能夠精準檢測弱啟動子的表達。
靈敏度更高：可檢測低至10‐20摩爾螢光素酶分子。
線性范圍更廣：線性檢測范圍超過酶濃度的8個數量級。
? 應用方向
精準測量轉錄調控，miRNA靶基因驗證，信號通路，轉錄因子和啟動子研究等。
? 適用樣本
哺乳動物細胞、原生質體、煙草葉片
? 數據展示
熒光強度媲美進口品牌
圖1. Yeasen（貨號：11402）熒光強度與P品牌相當，可替換進口品牌。
信號檢測更強，淬滅*
圖2. Yeasen（貨號：11402）檢測試劑和螢光素酶相互作用，可獲得最佳的發光強度，加入海腎螢光素酶底物后，螢火蟲螢光素發光淬滅情況：基本能夠*淬滅。
2 均質型輝光型報告基因檢測（貨號：11404、11405）
? 產品特點
信號穩定：半衰期長（達2h），非常適用于高通量檢測，再也不用擔心螢光信號淬滅的問題。
操作簡便：只需要加樣-讀值，即可完成實驗，擠出更多時間發paper。
準確度高：我有海腎螢光素酶的底物——腔腸素，可校正孔間細胞數量、轉染效率的誤差。
兼容性好：可用于多種常用細胞培養液，如RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等。
無刺激性氣味：還你一個清新愉快的實驗室環境。
? 應用方向
Fc effector檢測系統，信號通路，免疫檢查點檢測系統( immune checkpoint assays)，細胞因子、生長因子檢測和抗體內化研究的檢測系統等。
? 適用樣本
哺乳動物細胞、原生質體
? 數據展示
熒光強度和穩定性媲美進口品牌
圖3. Yeasen（貨號：11405）熒光強度和穩定性與P進口品牌相當。
淬滅效果與進口品牌相當
圖4. Yeasen（貨號：11405）檢測試劑和螢光素酶相互作用，可獲得最佳的發光強度，加入海腎螢光素酶底物后，螢火蟲螢光素發光淬滅情況，淬滅效果與P進口品牌相當。
在不同培養基上能正常發光，且發光效果差異小于P進口公司
圖5. Yeasen（貨號：11405）在常用培養基：DMEM、F12、MEMα、RPMI-1640中都可以正常發光，并且不同培養基中的發光效果差異小于P進口公司。。
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Q1：雙螢光素酶報告基因最適反應溫度？
A：室溫（20-22℃）。反應時各個組分（細胞裂解產物，底物工作液等）都需要調整到室溫。此兩種螢光素酶的反應速率是受溫度影響的，為了保證實驗的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測時都孵育至室溫。
Q2：雙螢光素酶報告基因載體該如何選擇？
A：1）螢火蟲螢光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構建的載體。。
2）海腎螢光素酶建議選取pRL-TK或pGL-4載體或者自己構建相應的載體。建議優先選用中等強度的啟動子（如TK），而不使用強啟動子（如SV40、CMV），以免影響主報告基因的表達，或進行實驗摸索選擇合適的載體。
Q3：檢測的熒光數值很低怎么辦？
A：檢測的熒光數值很低說明細胞裂解液中的螢光素酶含量很低。通常解決辦法為
1）轉染的質粒采用細胞轉染級別的質粒抽提試劑盒抽提。
2）優化轉染條件，盡可能的提高轉染效率。
3）增加實驗的細胞量，并且裂解細胞時，適當減少細胞裂解液的量。
Q4：進行檢測的過程中，熒光信號值太高該如何進行調整？
A：
1）在轉染實驗后，減少細胞的孵育時間。
2）降低熒光信號采集時間。
3）進行樣品的稀釋。
Q5：螢火蟲螢光素酶讀值和海腎螢光素酶讀值的比例多少時比較合適？
A：盡量保證對照組的螢火蟲螢光素酶的讀值和海腎螢光素酶的讀值接近，或者海腎螢光素酶的讀值比螢火蟲螢光素酶的讀值稍高。對于具體的實驗過程中，由于螢火蟲螢光素酶質粒和海腎螢光素酶的質粒抽提的質量不一致，待檢測目的調控元件的調控能力的不同等原因，一次實驗很難達到一個比較好的實驗結果，因此對于此實驗，我們推薦預實驗優化螢火蟲螢光素酶質粒和海腎螢光素酶質粒的共轉染量。
Q6：細胞培養、轉染時使用96孔板還是6孔板或者其他規格的細胞培養板？
A：一般來說，如果能保證10%的轉染效率，96孔板的細胞量就能夠達到實驗要求。如果細胞很難轉染或者待檢測的調控原件的調控作用很弱，可以增加實驗的細胞量。
Q7：此試劑盒采用何種儀器和檢測板檢測比較好？
A：檢測儀器：能檢測化學發光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同；檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標板。黑色酶標板也可用，但因黑色會吸收光信號，可能會降低信號。
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11401ES76 | 500 T |
11401ES80 | 1000 T | |
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11402ES60 | 100 T |
11402ES80 | 1000 T | |
Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit輝光型螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11404ES60 | 100 T |
11404ES80 | 1000 T | |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11405ES60 | 100 T |
11405ES80 | 1000 T |
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc螢光素酶報告基因質粒陽性對照 | 11556ES03 | 1 μg |
Luciferase Reporter Plasmid negative control （螢光素酶報告基因質粒陰性對照） | 11555ES03 | 1 μg |
pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-TK海腎螢光素酶報告基因質粒） | 11557ES03 | 1 μg |
pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎螢光素酶報告基因質粒） | 11558ES03 | 1 μg |
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Lysis Component 雙螢光素酶報告基因檢測裂解組分 | 11406ES60 | 100 T |
11406ES76 | 500 T | |
Luciferase Reporter Gene Assay Component螢火蟲螢光素酶檢測組分 | 11407ES60 | 100 T |
11407ES76 | 500 T | |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑 | 40802ES02 | 0.5 mL |
40802ES03 | 1.0 mL | |
MolPure® Endo-free Plasmid Mini Kit 無內毒素質粒小量提取試劑盒 | 19021ES50 | 50 T |
19021ES70 | 200 T |
HB210811
