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顯微鏡的照明方法匯總

時間:2015/6/23閱讀:3302
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                               顯微鏡的照明方法匯總

顯微鏡的照明方法按其照明光束的形成,可分為"透射式照明""落射式照明"兩大類。前者適用于透明或半透明的被檢物體,絕大數生物顯微鏡屬于此類照明法;后者則適用于非透明的被檢物體,光源來自上方,又稱"反射式照明"。主要應用于金相顯微鏡或熒光鏡檢法。
1 透射式照明
  生物顯微鏡多用來觀察透明標本,需要以透射光來照明。有兩種照明方式:
1 臨界照明  光源經過聚光鏡后,成像于物平面上。若忽略光能的損失,則光源像的亮度與光源本身相同,因此,這種方法相當于在物平面上放置光源。顯然,在臨界照明中,如果光源表面亮度不均勻,或明顯地表現出細小的結構,如燈絲等,那么就要嚴重影響顯微鏡觀察效果,這是臨界照明的缺點。其補救的方法是在光源的前方放置乳白和吸熱濾色片,使照明變得較為均勻和避免光源的長時間的照射而損傷被檢物體。用透射光照明時,物鏡成像光束的孔徑角,被聚光鏡像方光束的孔徑角所決定,為使物鏡的數值孔徑得到充分利用,聚光鏡應有與物鏡相同或稍大的數值徑。
2 柯拉照明  臨界照明中物面光照度不均勻的缺點,在柯拉照明中可以消除。在光源與聚光鏡之間加一輔助聚光鏡。可見,由于不是直接把光源,而是把被光源均勻照明了的輔助聚光鏡(也稱為柯拉鏡)成像在標本上,所以物鏡的視場(標本)得到均勻的照明。
2 落射式照明
在觀察不透明物體時,例如通過金相顯微鏡觀察金屬磨片,往往是采用從側面或者從上面加以照明的方式。此時,被觀察物體的表面上沒有蓋玻璃片,標本像的產生是靠進入物鏡的反射或散射光線。
3 用暗視場來觀察微粒的照明方法
用暗視場方法可以觀察超顯微質點。所謂超顯微質點,是指那些小于顯微鏡分辨極限的微小質點。暗視場照明的原理是:不使主要的照明光線進入物鏡,能夠進入物鏡成像的只是由微粒所散射的光線。因此,在暗的背景上給出了亮的微粒的像,視場背景雖暗,但襯度(對比)很好,可以使分辨率提高。
暗視場照明又有單向和雙向之分:
1 單向暗視場照明  由照明器發出的光線,經不透明的標本片反射后,主要的光線都沒有進入物鏡,進入物鏡的光線主要是由微粒或凸凹不平的細部所散射的光線。顯然,這種單向的暗視場照明,對觀察微粒的存在和運動是有效的,但對物體細節的再現不是有效的,即存在"失真"的現象。
2 雙向暗視場照明  雙向暗視場照明,可以消除單向所產生的失真缺點。在普通的三透鏡聚光鏡前面,安置一個環形光闌,即可實現雙向暗視場照明。在聚光鏡的zui后一片與載物玻璃片之間浸以液體,而蓋玻璃片與物鏡之間是干的。于是,經過聚光鏡的環形光束,在蓋玻璃片內全反射而不能進入物鏡,形成如圖中的回路。進入物鏡的只是由 標本上的微粒所散射的光線,形成了雙向暗視場照明。

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