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2-氨基-4-噻唑-乙酸甲酯實驗原理以及合成
閱讀：1448 發布時間：2013-9-62-氨基-4-噻唑-乙酸甲酯實驗原理
62.5mgTS，34.5mgN-羥基琥珀酰亞胺酯和45.3mg 1,3-二環己基碳二亞胺在1.5ml的干燥的N,N-二甲基酰胺中反應18h， 4o C，通過濾過作用移除生成的二環乙基脲沉淀物，得到濾液。濾液被加到含有65mgLPH 2ml的PBS中，用NaOH調節PH到7.6。這個混合液在4o C，攪拌24h。通過TLC檢測磺胺藥有沒有聚合現象。因為低堿性自由的氨基磺酸簇（例如，磺胺噻唑pka是2.36），尤其賴氨酸的氨基簇（pka10.28）。可能是每一種氨基酸形成酰胺的主要原因。24h后，這個反應混合物被轉移到透析液里，透析對抗1L 8M尿素12h，透析液被移到4L，50mM的碳酸氫氨中，接著移到4L，25mM的碳酸氫氨，每一種透析液至少8h。透析袋中的內容物被凍干。TS-bsa使用相同的方法，bsa代替LPH。
2-氨基-4-噻唑-乙酸甲酯的合成：
1. 在冰浴中，將無水硫酸鈉干燥的甲醇100ml，加到一個250ml的三頸燒瓶。
2. 將鹽酸氣體加到裝有甲醇的燒瓶中，不停攪拌，產生大量氣泡。當溶液的質量增加大約60g，停止加鹽酸。
3. 將2.1g的2-氨基-4-噻唑乙酸緩慢的加到燒瓶里，除去冰浴，攪拌10分鐘。
4. 燒瓶中的溶液進行回流6小時，此時為輕微的黃色溶液。
5. 將溶液移入一個快速蒸發儀中，加入25ml干燥的甲醇，移除溶劑。
6. 從乙酸乙酯和甲醇中再結晶出來的固體為合成的固體（熔點為169-171o C），即2-氨基--噻唑乙酸甲酯，淺黃色。
N4-乙酰基-N1-{4-[（甲氧羥基）甲基]-2-噻唑}-磺胺的合成：
1. 將2.65gN-Acetylsulfanilyl chloride（ASC）加到一個50ml的圓底燒瓶中，在攪拌下，加入5ml干燥的吡啶。
2. 將1.50g的2-氨基-4-噻唑乙酸乙酯緩慢的加入到吡啶溶液中，維持溫度在不超過40 o C。溶液為褐色的，進行回流，1.5h，冷卻到室溫。
3. 緩慢攪拌下，加入30ml溫水，用二氯甲烷（3*25）萃取。
4. 二氯甲烷層用硫酸鈉干燥，濾過，同時大部分溶劑用快速旋轉蒸發儀移除。加入大約5g硅膠，移除剩余的溶劑，留下一些淡黃色的粉末。這些粉末經過一個50g的二氧化硅柱（50*2.4），這個柱子用150ml 1:4的甲醇-氯仿洗脫，.移除這些溶劑，得到N4-乙酰基-N1-{4-[（甲氧羥基）甲基]-2-噻唑}-磺胺（1.6g，50%產量）。
N-[ 4- Carboxymethy1） -2-thiazolyl]sulfanilamide（TS）的合成：
25ml，2MNAOH溶液加到提純的0.95g N4-乙酰基-N1-{4-[（甲氧羥基）甲基]-2-噻唑}-磺胺中，回流2h，冷卻至室溫后，用6N的鹽酸調節PH到4.0。得到的渾濁的溶液用乙酸乙結合物測定抗原決定簇密度和自由芳香族氨基的存在。