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一、測(cè)定原理：上海哈靈生物科技有限公司生產(chǎn)的過(guò)氧化物酶(POD)測(cè)試盒利用過(guò)氧化物酶(POD)催化過(guò)氧化氫反應(yīng)的原理，通過(guò)測(cè)定420nm處吸光度的變化得出其酶活性。

二、試劑的組成和配制：（試劑盒有效期6個(gè)月）

• 試劑一：60mL液體×4瓶，4℃保存。

• 試劑二：粉劑×3瓶，4℃保存。

• 試劑二應(yīng)用液的配制：臨用每瓶粉劑加入10mL的雙蒸水溶解，4℃避光保存。（顏色變深以后棄用）

• 試劑三：5mL液體×1瓶，4℃保存。

• 試劑三應(yīng)用液的配制：臨用前用蒸餾水15～30倍稀釋，使得在1cm光徑、波長(zhǎng)240nm下，蒸餾水調(diào)零時(shí)，試劑三應(yīng)用液的吸光值保持在0.4左右，現(xiàn)用現(xiàn)配。若吸光值太高，則加蒸餾水稀釋；若吸光值太低，則加入適量試劑三。（一般在25倍左右稀釋）

• 試劑四：50mL液體×2瓶，4℃保存。

三、所需儀器及試劑：上海哈靈生物科技有限公司推薦使用可調(diào)420nm波長(zhǎng)的可見(jiàn)光分光光度計(jì)及1cm石英光徑比色皿，以及可調(diào)240nm波長(zhǎng)的紫外光分光光度計(jì)，渦旋混合器，離心機(jī)，37℃水浴鍋，秒表，蒸餾水，生理鹽水等儀器和試劑。

四、操作步驟：

1. 前處理：

• 植物組織勻漿的制備：準(zhǔn)確稱取植物組織重量，按照重量（g）:體積(mL)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)（推薦使用生理鹽水(0.86%或0.9%的NaCl水溶液)或磷酸鹽緩沖液︰0.1mol /L pH7～7.4），冰水浴條件下制備成10％的組織勻漿液，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

2. 操作表：

• 測(cè)定管 對(duì)照管

• 試劑一 (mL) 2.4 2.4

• 試劑二應(yīng)用液(mL) 0.3 0.3

• 試劑三應(yīng)用液(mL) 0.2

• 雙蒸水(mL) 0.2

• 樣本(mL) 0.1 0.1

• 37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘

• 試劑四(mL) 1.0 1.0

• 混勻后，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清于420nm處，1cm光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定OD