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滬鼎生物與您雨日暢談抽提蛋白質(zhì)的那十一個環(huán)節(jié)
閱讀：836 發(fā)布時間：2014-2-25 坐在窗子旁邊能聽見雨水滴落的聲音，又近乎中午，仿佛今天才剛剛開始。也就是差不多一個小時前，王接到了技術(shù)人員發(fā)來的郵件，這是一個實驗的過程。您看到本文的標(biāo)題定知曉是什么實驗了，下面我們就進入今天的主題來說，滬鼎生物與您雨日暢談抽提蛋白質(zhì)的那十一個環(huán)節(jié)。
在步驟環(huán)節(jié)之前，這里先跟您簡略的說明一下，蛋白質(zhì)在細(xì)菌中表達(dá)后，以反復(fù)的冷凍-解凍方法打破細(xì)胞，再用硫酸銨把蛋白質(zhì)沉淀下來，此步驟可以去除大部份核酸、多醣、脂質(zhì)等雜物。那么實驗的那十一個步驟是怎么樣的？
1、挑取培養(yǎng)皿上單一菌落，培養(yǎng)在15 mL 的LB/amp/kan 液體培養(yǎng)基中，以120 rpm 轉(zhuǎn)速震蕩，在37℃下培養(yǎng)經(jīng)過一個晚上。
2、取上述菌液6 mL加入300 mL新鮮LB/amp/kan培養(yǎng)基中，以120 rpm 37℃培養(yǎng)至A600 = 0.6 后，加入IPTG成為1 mM濃度，繼續(xù)以120 rpm在37℃震蕩培養(yǎng)4 h。
3、將菌液倒入50 mL 離心管 （conical tube） 中離心10 min （5 000 rpm）。
4、倒去上清，可將菌塊連同離心管置 -20℃冰箱貯存。
5、取出含菌塊的離心管置碎冰上，待菌塊溶解后，以殘存液體均勻懸濁的。再加入10 mL lysis buffer 輕輕懸浮的。
6、將菌液放在液態(tài)氮中冷凍1 min,然后在37℃水浴中搖蕩溶解的。如此反復(fù)三次，盡量不要產(chǎn)生大量氣泡。將離心管的內(nèi)容物倒入50 mL 高速離心機的離心管內(nèi)。
7、離心20 min （12 000 rpm，4℃） 取上清共 _____ mL，稱為 粗抽取液 （XT）；預(yù)留100 μL 以便日后一起進行分析。此后樣本均得放置碎冰上，以低溫進行實驗。
8、此上清加入5 mL buffer A-0 混勻后倒入燒杯，置碎冰上放冷，不時攪拌并緩緩加入固體硫酸銨 _____ gm,使成為70%飽和度，加完后再攪拌10 min。
9、離心20 min （12 000 rpm，4℃） 后小心倒去上清，取白色沉淀部份。
10、沉淀加以2 mL buffer A-150 均勻懸濁的，再以桌上型離心機去除不溶物質(zhì)，（10 000 rpm，5 min），共得 ______ mL，稱為 全蛋白質(zhì) （TP）；預(yù)留100 μL,連同上述XT 置4℃冷藏。
11、其余溶液部份準(zhǔn)備進行膠體過濾層析，標(biāo)示清楚后置4℃冷藏。
以上就是實驗的十一個步驟，滬鼎生物感謝您的支持！二月尾巴啦，需要購買產(chǎn)品的朋友們抓緊來電哦！因為我公司的近期*還在進行中，會送小禮物哦。實驗已經(jīng)結(jié)束了，您一定想知道，實驗中需要用到哪些儀器與試劑呢？上海滬鼎還特別為您整理出了儀器試劑等數(shù)據(jù)列表。
恒溫震蕩培養(yǎng)箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （使用20,000 rpm離心陀）使用高速離心機要注意： 離心機及離心陀的溫度要預(yù)冷*，相對位置的兩只離心管要平衡好，離心陀轉(zhuǎn)速不能超過zui高速限；液態(tài)氮及冰筒；37℃溫水浴。
需要用到的試劑有：LB amp kan液體培養(yǎng)基、IPTG、Na3PO4·12H2O、NaCl、EDTATriton、X-100液氮。上海滬鼎生物的產(chǎn)品價格是保證的哦！并且有，購買我公司試劑在實驗過程中如果遇到了不懂的問題可電詢。