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Elisa技巧學習很重要
閱讀：1527 發布時間：2015-6-25Elisa試劑盒實驗經驗是需要操作者們自身積累的，但是掌握了實驗技巧之后可對實驗的學習與操作事半功倍。Elisa技巧學習很重要！下面一起來看看上海滬鼎生物公司今天給大家帶來了哪些實驗技巧內容：
抗原抗體反應要求在zui適比例條件下進行，ELISA反應試劑多，其工作濃度不同對結果影響較大，因此必須對包被抗原(抗體)和酶標抗體(抗原)進行*工作濃度的滴定和選擇，以達到*的測定條件。
(一)方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度：
用包被液將抗原作一系列稀釋(1:50～l:800)后，按行進行包被、洗滌。按列分別加入用稀釋液1:100稀釋的強陽性、弱陽性、陰性參考血清及稀釋液(作空白對照)，保溫，洗滌。加工作濃度酶標抗體，洗滌，加底物顯色，加酸終止反應后讀取A值。選擇強陽性參考血清A值；為0．8左右，陰性參考血清A值<0．1的包被抗原稀釋度為工作濃度。
(二)方陣(棋盤)法選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度：
將抗體用包被液稀釋為10mg/L、lmg/L、0.1mg/L三個濃度按行包被，每一個濃度包被三行(每行3孔)，分別在每個濃度包被的*、二、三行中分別加入強陽性抗原，弱陽性抗原和陰性對照，將酶標抗抗體用稀釋液稀釋為1:l 000、l:5000、l:10000三個濃度，分別加入每個濃度包被的*、二、三列中。加底物顯色，加酸終止反應，分別讀取A值。以強陽性抗原液A值在0.8左右，陰性參考A值<0.1的條件為zui適條件。據此選擇包被抗體和酶標抗體的*工作濃度。
抗體的稀釋度包括特異性抗體，中間抗體及標記抗體。任何一種免疫組化方法要想得到令人滿意的染色效果，必須將抗體進行*稀釋。一般來說，抗體的稀釋度取決于下列因素。
1.抗體的濃度(亦稱滴度)
每毫升溶液內所含抗體分子越多，滴度就越高，該抗體可高度稀釋，尤其是特異性一抗的稀釋度。一般商品化抗體只知道每毫升含多少抗體蛋白量，不知道所含抗體分子。自己制備抗體可通過瓊脂糖雙擴散或放射免疫法進行測定。商品化抗體一般告知大約的稀釋度，例如用PAP法可1：100～1：200稀釋。但往往購買到一種新抗體后，需要利用組織切片進行*稀釋度的測定。
2.抗體的配制
抗體的配制及使用是開展免疫組織化學工作的一個重要環節，其檢測的結果既要可靠，又要能重復，這就要求實驗人員在配制抗體過程中要注意其度。目前，隨著抗體稀釋液的穩定性提高，一次稀釋抗體可用一年。當然，還可以購買到商品化即用型一抗，使用非常方便。
3.抗體稀釋液的種類
可根據需要選擇不同的抗體稀釋液。如稀釋當天用完的一抗，用0.05m01/L(pH7.6)TBS即可。如需長期保存，可用如下稀釋液：取0.1g明膠(或綠色明膠)溶在100ml0.05m01/L(pH7.6)TBS緩沖液中，邊攪拌邊加熱至60℃，待*溶解后，冷卻至室溫，加入1g牛血清白蛋白，zui后加入200mg aN3，分裝保存在一40℃中備用。另外，抗體原液應分裝后一40℃保存，可保存5年以上。
Elisa試劑盒應保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。上海滬鼎生物公司提醒您：從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。咨詢采購高品質進口/國產Elisa試劑盒，歡迎您致電我公司業務員。