化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
上海滬鼎教您處理ELISA試劑盒的六大重點(diǎn)標(biāo)本
閱讀：1371 發(fā)布時(shí)間：2014-12-5 為什么ELISA方法那么受歡迎？因?yàn)槠鋬?yōu)點(diǎn)多，易操作，能夠檢測(cè)數(shù)種標(biāo)本。然而，能夠影響到ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有很多，其中就包括標(biāo)本的處理。但是不同類型的標(biāo)本處理方法不同，這也就是今天的重點(diǎn)資料內(nèi)容了。上海滬鼎教您處理ELISA試劑盒的六大重點(diǎn)標(biāo)本：
一、尿液、唾液
1000×g離心20min，取上清即可檢測(cè)。但由于ELISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量，應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注意：還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因?yàn)镹aN3會(huì)抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。
二、細(xì)胞裂解液
① 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
② 收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
③ 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
④ 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g離心10min，除去細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
三、細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
四、組織勻漿液
① 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
② 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分
③ 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿)
④ 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
五、血清
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃放置一個(gè)晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出)4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
注意：采血過程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽性。
六、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
以上就是ELISA實(shí)驗(yàn)的六大重點(diǎn)檢測(cè)標(biāo)本的處理方法，方法用對(duì)了才能夠保證實(shí)驗(yàn)效果哦！當(dāng)然啦，操作中還需要您認(rèn)真對(duì)待與足夠的耐心。本公司可為您提供ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù)，上海本地還可以上門取樣哦！