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上海滬鼎生物科技有限公司>技術文章>ELISA試劑盒8大特殊樣本處理方法

技術文章

ELISA試劑盒8大特殊樣本處理方法

閱讀:158          發布時間:2025-4-21

一、唾液樣本

采集規范

空腹采集,避免進食后30分鐘內取樣(唾液淀粉酶含量升高干擾檢測)

使用無菌唾液采集管,避免口腔黏膜細胞混入


處理流程

樣本收集后立即于-70℃速凍1小時,冰上融化后10000rpm離心10分鐘取上清短期保存(<7天)可置于4℃,長期需分裝后存于-80℃(保存期≤2個月)


二、尿液樣本

采集要求

無菌管收集中段尿,避免微生物污染

樣本體積需≥50μL(適配微量ELISA試劑盒)

預處理要點

2000-3000rpm離心20分鐘,取上清檢測;若沉淀復現需二次離心

高濃度尿素樣本建議1:5 PBS稀釋后檢測(降低基質效應)


三、糞便樣本

均質化處理

取干燥糞便塊(>50mg)與PBS按1:9(w/v)混合,冰浴超聲破碎后5000×g離心10分鐘

建議添加0.05M EDTA緩沖液(抑制金屬蛋白酶活性)


儲存規范

分裝后-80℃保存≤2個月,避免反復凍融(凍融次數≤3次)


四、腦脊液樣本

采集禁忌

需專業腰椎穿刺獲取,避免血液污染(紅細胞裂解釋放血紅蛋白干擾檢測)

采集后30分鐘內完成離心處理


離心參數

2000-3000rpm離心20分鐘,取透明上清液

高脂樣本需超速離心(10000×g,15分鐘)去除脂蛋白干擾


五、胸腹水樣本

細胞碎片清除

無菌管收集后立即離心(2000-3000rpm,20分鐘)

渾濁樣本可添加1% Triton X-100裂解細胞(驗證對靶標無影響)


儲存條件

分裝后-80℃保存≤3個月,復溶時37℃水浴緩慢解凍


六、組織勻漿樣本

勻漿制備規范

新鮮組織剪碎后按1:9(w/v)加入預冷PBS,冰浴勻漿至無可見顆粒

建議添加蛋白酶抑制劑(如1mM PMSF)防止靶標降解


離心參數

5000×g離心5分鐘取上清,脂質層用注射器針頭小心吸除


七、細胞裂解液樣本

裂解關鍵步驟

貼壁細胞用預冷PBS清洗3次后加入RIPA裂解液(含1%蛋白酶抑制劑)

裂解后10000-14000×g離心5分鐘,避免使用含SDS裂解液(干擾包被抗體)


八、精液/陰道分泌物樣本

液化處理

精液樣本需37℃孵育30分鐘液化,4000rpm離心10分鐘取精漿

陰道分泌物需2000-3000rpm離心20分鐘去除上皮細胞


檢測優化

高黏稠樣本建議1:3 PBS稀釋(降低背景信號)

驗證基質效應:比較稀釋樣本與標準曲線斜率偏差(偏差>15%需重新處理)


科研場景關鍵質控點

1.抗干擾策略

高脂血癥/溶血樣本:超速離心(12000×g,15分鐘)或脂質吸附柱預處理

蛋白酶污染風險:全程冰上操作,添加廣譜蛋白酶抑制劑

2.穩定性驗證

凍融實驗:比較新鮮樣本與凍融后樣本OD值差異(CV需<10%)

長期保存:-80℃樣本每2個月檢測一次靶標回收率(≥80%為合格)

3.數據校準

高背景值處理:設置空白孔(僅加樣本稀釋液)扣除本底信號

濃度超限樣本:梯度稀釋后復測,選取OD值落在線性區間內的稀釋度

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