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腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA實驗
閱讀：493 發(fā)布時間：2025-3-3一、實驗概述?
腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA實驗是一種常用的免疫學實驗方法，用于檢測生物樣本（如血清、血漿等）中TNF-α的濃度。該實驗基于酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，通過雙抗體夾心法實現TNF-α的特異性檢測。
二、實驗步驟?
準備工作?
獲取TNF-α ELISA試劑盒，確保試劑盒在保質期內且保存條件符合要求。
準備實驗所需器材，包括酶標儀（450nm波長）、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱、蒸餾水或去離子水等。
?包被孔板?
如使用未包被好的孔板，需自行用TNF-α抗體進行包被。
將包被好的孔板置于4℃冰箱中孵育過夜（16-18小時），以確保抗體充分結合。
?洗板?
包被完成后，使用洗板機洗板4次，以去除未結合的抗體。
?加入封閉液?
向孔板中加入封閉液，封閉非特異性結合位點。
?加樣與孵育?
向孔板中加入待測樣本或標準品，然后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體。
將孔板置于37℃恒溫箱中孵育一定時間，使抗原與抗體充分結合。
?再次洗板?
孵育完成后，再次使用洗板機洗板，以去除未結合的檢測抗體。
?顯色與測定?
向孔板中加入顯色底物（如TMB），在HRP的催化下顯色。
顯色完成后，加入終止液終止反應。
使用酶標儀在450nm波長下測定各孔的吸光度（OD值）。
?結果計算?
根據標準品的OD值和濃度繪制標準曲線。
根據待測樣本的OD值，在標準曲線上查找對應的TNF-α濃度。
三、實驗注意事項?
實驗過程中需嚴格控制操作時間和溫度，以確保實驗結果的準確性。
使用高質量的試劑和器材，避免非特異性結合和污染。
實驗結果需進行質量控制，如設置陰性對照和陽性對照，以確保實驗的有效性。
四、實驗應用?
TNF-α ELISA實驗在生物學和醫(yī)學研究中具有廣泛應用，可用于評估TNF-α在疾病發(fā)生和發(fā)展中的作用，以及評估藥物治療效果等。但需注意，該實驗僅供科研使用，嚴禁用于臨床診斷?
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