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酶聯免疫測定技術(ELISA)的放大系統
閱讀：789 發布時間：2023-5-31 酶免疫測定自20世紀70年代初創立以來，由于其具有特異、靈敏、簡便、快速的特點，現已在生物醫學研究領域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應用，相對于放射免疫測定(RIA)技術來說，EIA還有試劑半衰期長，對環境污染小，試驗廢物易于處理等優點，但測定敏感性一般較RIA低，于是，為提高EIA的測定敏感性，出現了眾多的EIA測定放大系統，使EIA的測定敏感性趕上甚或超過了RIA。
建立正IA測定放大系統的一般原則
EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等]作標記物的，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量；②非顯色底物的應用；③附加一個受標記酶催化的反應系統。
一、增加標記酶的量
通過生物素／親合素—酶或酶／抗酶復合物的間接方法，可以增加ELISA測定中最后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能。
二、非顯色底物的應用
從酶的反應底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發光物，從而提高EIA的測定敏感性，這種方法的優點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器。
三、附加一個受標記酶催化的反應系統
原始標記酶催化附加一個反應系統，如酶底物反應循環或酶級聯反應，從而達到反應放大的目的。這種由數個催化反應的耦聯而構建的放大系統，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來源于真正的信號放大，而不是簡單地將一個分子轉變為更多的易于測定的分子。一個適用的酶放大系統的選擇除了要考慮生化因素外，最為重要的是酶及其底物的穩定性，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復性有較大的影響。