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技術文章

ELISA試劑盒實驗前如何做好優化?

閱讀:713          發布時間:2023-4-20


ELISA試劑盒包被條件的優化:

 

1、包被液的挑選:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假定包被的抗原在堿性條件下不穩定的話,也能夠運用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。

 

2、包被濃度的挑選:包被的最適濃度隨固相載體和包被物的性質改動,一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要清楚關于特定包被抗原的最適包被濃度需求通過實驗來斷定。

 

3、包被溫度的挑選:一般是4-8度條件下放置一個黑夜或許37度保溫2小時,咱們激烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅持。

 

4、包被抗原的挑選:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,一般難于直接吸附在酶標板上,一般都先使其與無關蛋白質,比如BSA等偶聯,偶聯物吸附于固相載體上。

 

ELISA試劑盒加樣的優化:

 

 在這一進程中,一般狀況下有三次加樣,它們分別是加標本,加酶物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質部分濃縮,分布不均,應充沛混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上激烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只需待血清天然凝結、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血清標本,然后在微型顫動器上顫動1分鐘以確保混和。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,逾越一星期測定的需低溫冰存。


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