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技術文章

關于ELISA試劑盒的實驗操作,這些細節(jié)很重要

閱讀:596          發(fā)布時間:2023-3-1


ELISA試劑盒實驗操作中,須特別注意細節(jié)問題,細節(jié)往往決定著試驗的成功與否。關于ELISA試劑盒的實驗操作,這些細節(jié)很重要:

 

1、吸取液體時速度不易太快,以免產生氣泡,人ELISA試劑盒吸取的量不夠準確。

 

2、吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。

 

3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

 

4、合理安排檢測量,以免反應板過多造成洗板等待時間長。

 

5、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。

 

6、未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液。

 

7、要盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數據的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。

 

8、每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

 

9、手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置1530s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

 

10、樣品稀釋液應用加液器加注,并經常校對其準確性。

 

11、為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。

 

12ELISA試劑盒實驗中,加樣后及時放人孵箱,標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗che底。

 

13、剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

 

14、對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

 

15、沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。

 

16、在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。

 

17、人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。


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